临床生物化学与检验(刘宁).docVIP

一、血清白蛋白测定（溴甲酚绿法） (一)实验原理：在PH4.2的缓冲液中，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚绿（BCG）生成蓝绿色复合物，在波长628nm处有吸收峰。复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白蛋白标准液比较，可求得血清中白蛋白的浓度。 （二）实验试剂： 1、BCG试剂：于950ml蒸馏水中，加入0.105gBCG，8.85g琥珀酸，0.100g叠氮纳，和4mlBrij-35（聚氧化乙烯月桂醚，300g/l）。待完全溶解后，用6mol/L氢氧化钠悔液调节至pH 4.15 - 4.25。最后用蒸镏水稀释至1L。贮存于聚乙烯塑料瓶中，密塞，该试剂置室温中至少可稳定6个月。 2、BCG空白试剂：除不加入BCG 外，其余成分和配制程序完全同BCG 试剂的配制方法。 3、40g/L 白蛋白标准液 （三）操作： 按下表操作 加入物（ml） 测定管（U） 标准管（S） 空白管（C） 待检血清 0.02 白蛋白标准液 0.02 蒸馏水 0.02 BCG试剂 5.0 5.0 5.0 分光光度计波长628 nm，用空白管调零，然后逐管定量加入BCG 试剂，并立即混匀，每份血清标本或标准液与BCG试剂混合后(30 士3) s，读取吸光度。 （四）计算 血清白蛋白（g/L）=×白蛋白标准液浓度（g/L） （五）参考区间 4 -14 岁儿童，血清白蛋白浓度为38 - 54 g/L 健康成人血清白蛋白浓度为34 -48 g/L （六）附注 1. 可60g/L白蛋白标准与BCG 结合后，比色杯光径1. 0 cm ，在628 nm 测定的吸光度应为0.811 士0.035 ，如达不到此值，表示灵敏度较差。 2. 此法测定正常血清标本的批间变异系数为6.3% 左右。 3. 试剂中的聚氧化乙烯月桂醚也可用其他表面活性剂代替，如吐温-20 等，用量为2ml/L. 思考：血清和标准液与BCG试剂混合后，为什么在30±3s内读取吸光度？ 二、血糖测定 （一）、实验目的： 人和动物血糖浓度受神经、激素的调节，维持相 对稳定。胰岛素和肾上腺素是调节血糖浓度的两种重要激素，前者使血糖浓度降低，后者使血糖浓度升高。 人体血糖浓度随生理状况改变和病理性疾病的发生而改变，测定其浓度高低可以对糖代谢性并发症进行诊断。 （二）、实验原理： 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。? （三） 实验试剂： 1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠8.67g及无水磷酸二氢钾5.3g溶于蒸馏水800ml中，用1mol/L氢氧化钠(或1mol/L盐酸)调pH至7.0，用蒸馏水定容至1L。?2．酶试剂 称取过氧化物酶1 200U，葡萄糖氧化酶1 200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮钠100mg，溶于磷酸盐缓冲液80ml中，用1 mol/L NaOH调pH至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置4℃保存，可稳定3个月。?3．酚溶液 称取重蒸馏酚100mg溶于蒸馏水100ml中，用棕色瓶贮存。?4．酶酚混合试剂 酶试剂及酚溶液等量混合，4℃可以存放1个月。?5．12mmol/L苯甲酸溶液 溶解苯甲酸1.4g于蒸馏水约800ml中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至l L。?6．100mmol/L葡萄糖标准贮存液 称取已干燥恒重的无水葡萄糖1.802g，溶于12mmol/L苯甲酸溶液约70ml中，以12mmol/L苯甲酸溶液定容至100ml。2h以后方可使用。?7．5mmol/L葡萄糖标准应用液 吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml放于100ml容量瓶中，用12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。? （四） 实验器材： 100mm×100mm试管、试管架、记号笔、恒温水浴、分光光度计、移液器。 （五）. 实验操作： 1．自动分析法 按仪器说明书的要求进行测定。?2．手工操作法取试管3支，按下表操作。? 葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤? 加入物（ml） 空白管 标准管 测定管? 血清 －