12色谱基础解说.ppt

* d.电化学检测器 电解池，具有氧化还原性能化合物流进检测器即发生电解反应，产生电流经放大而被检查。主要用于具有电活性的硝基、氨基等还原基团的有机化合物的检测。 灵敏度很高，最低检测限达10-12g * 三、高效液相色谱类型 液固吸附色谱 液-液分配色谱 化学键合色谱 离子交换色谱 离子色谱 凝胶色谱 固定相和分离机理 * 1、液固吸附色谱 固定相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂； 流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；不宜分离同系物。 缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾； * 极性吸附剂上有机化合物的保留顺序如下： 氟碳化合物饱和烃 烯烃芳烃有机卤化物醚硝基化合物腈叔胺酯醛酮醇伯胺酰胺羧酸磺酸 1、液固吸附色谱 * 2、液液分配色谱 固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。 * 3、化学键合色谱 原理：通过共价键将有机固定液结合到硅胶载体表面 特点：通过改变流动相组成和种类来有效分离极性、非 极性和离子型化合物，所用键合固定相不易流失， 适用于梯度洗脱。 缺点：键合固定相不适合于酸、碱度过大或含有氧化剂 的缓冲溶液做流动相。 正相色谱：流动相极性比固定相极性小 反相色谱：流动相极性比固定相极性大 * S i O H + R O H S i O R + H 2 O S i O H + R 3 S i C l S i O S i R 3 + H C l 官能团引入方法 S O C l 2 C l R M g C l R S i O H S i C l S O C l 2 R M g C l S i R * 4、离子交换色谱 固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂； 流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液； 基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长； 阳离子交换：R—SO3H +M+ = R—SO3 M + H + 阴离子交换：R—NR4OH +X- = R—NR4 X + OH- 应用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。 * 5、排阻色谱 固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)； 原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙，由其中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。 全部在死体积前出峰； 可对相对分子质量在100-105范围内的化合物按质量分离 类别：凝胶过滤色谱、凝胶渗透色谱 用途：分析高分子聚合物的相对质量分布 * M.W. tR * M.W. tR * M.W. tR * M.W. tR * 五、高效液相色谱法的应用和进展 1、在生物化学和生物工程中的应用 2、在医药研究中的应用 3、食品分析 4、环境分析 5、精细化工 * * * * 4. 进样量的选择 进样量 柱效 进样量过大，使色谱柱超载，柱效急剧下降，峰形变宽 检测器 进样量过大，峰高或峰面积与进样量的线性关系被破坏· 进样量应控制在柱容量允许范围 及检测器线性检测范围之内 * §12-3 气相色谱分析方法及应用 一 定性分析 1 用已知纯物质 对照定性 保留值定性 峰高增加法定性 * 2 用经验规律和文献值定性 (1)