组织制片技术概述幻灯片.pptVIP

切 片 石蜡切片 用石蜡作为包埋剂制作的切片称为石蜡切片，是组织切片中应用最为广泛的一种切片，其优点是易于制作大量菲薄的组织标本，而且石蜡包埋块又可长期保存。 仪器及器材准备 切片机 切片刀 恒温水箱式摊片仪 经过清洁处理的载玻片 眼科弯镊子 中号羊毫毛笔 粘片剂 * * 组 织 制 片 技 术 主讲：张端莲 组织制片的意义和目的 组织标本制作的方法 组织切片标本制作的基本程序 苏木精—伊红染色的程序 组织制片的意义和目的 组织制片技术是随着生命科学的发展而不断进步的。利用组织切片染色(staining)的方法所制出的标本显示了各种组织细胞的不同结构和形态，它们之间的相互连接及它们之中的某些化学成分的种类和含量的变化，为细胞分子学的研究提供了最直观的依据。因此组织制片是研究医学和生物学的一个最基本和最重要的手段 组织标本制作的方法 组织切片法 非组织切片法 组织切片法 利用化学试剂将组织经过一系列的固定(fixation)、脱水、透明后，再利用石蜡或火棉胶和明胶等支持物渗透进组织内部，使组织保持一定的硬度，并包埋(embedding)成块，然后依靠切片机(microtome)将包埋好的组织块切成以微米计的薄片，再根据需要进行各种染色得到的供显微镜下观察的标本的方法。 石蜡切片、火棉胶切片、明胶切片 冰冻切片 非组织切片法 组织不经过切片手续制成的观察标本的方法为非组织切片法。 包括：涂片、压片、铺片、磨片、消化分离、活体标本、整装标本、血管注射标本。 涂片 将所采的血液或骨髓样品涂抹于载玻片上经瑞氏或姬姆萨染色后的标本。 压片 先将组织处理成小块物质，然后经化学药品软化和染色，再用盖玻片压封于载玻片上的标本。例如运动终板等。 铺片 将需要观察的薄片组织用手工的方法直接铺于载玻片上，然后经过固定、染色等程序制成的标本。例如蛙的肠系膜铺片，大白鼠的皮下组织铺片等。 磨片 骨，牙齿等组织，不经脱钙和切片，直接在磨石上用手工磨成大约50微米左右的薄片，然后再进行染色封固在载玻片上的标本。 消化分离 将组织分离成小块，然后利用相应的化学药品水溶液将其细胞间质消化溶去，再用机械分离的方法，如利用水的震荡冲击力等，使小块组织分离成单个而又完整的细胞，经染色后涂于载玻片上封固的标本。例如平滑肌分离标本，脊髓的运动神经细胞等。 活体标本 将所采的观察标本加生理盐水后直接滴于载玻片上在显微镜下观察。 整装标本 一种是将胚胎或小动物经前期固定后整体封藏于盛满固定剂的透明容器中。 另一种是将发育至某一阶段的鸡胚整体取出，经固定、染色、脱水、透明后封固于载玻片上的标本。 血管注射标本 一种是将有色物质注射进血管，用酸或硷将血管周围的组织腐蚀后做成的整体封藏的血管标本。 另一种是将有色物质注射进血管后，经一系列制片技术处理后封固于载玻片上供显微镜下观察的标本。 组织切片标本制作的基本程序: 取材—固定—固定后处理—脱水— 透明—浸蜡—包埋—切片—染色—封固 取 材 动物的处死 处死动物要求手法迅速、快捷，避免动物因过度痛苦而产生组织细胞的变化。 处死动物的几种常用方法： 麻醉法 空气栓塞法 击头法 颈椎脱臼法 破坏脑和脊髓 股动脉放血 取材的方法： 选择动物 选择取材部位 选择切面方向 ? 根据实验工作的目的选择动物 取材应根据实验