(29.临床试验资料综述.docVIP

（一）临床文献与试验总结 1、临床文献总结 采用大量关于四君子汤的临床文献，包括药理作用及其作用机制，临床应用的大量实例资料。为阐明四君子护康颗粒的疗效作出的理论依据。 2、临床试验总结 2.1生物药剂学研究 1仪器与材料 1．1 仪器 HL-2型恒流蠕动泵(上海沪西生化仪器厂)；LC．IOAT VP高效液相色谱仪(岛津公司)；SPD．10AVP紫外检测器(岛津公司)；XW-80A型旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)；Sartorius电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)；水浴摇床(江苏国胜仪器厂)。 1．2药品和试剂 PNS(自制。Rgl和Rbl的质量分数分别为26．20％和32．04％)；四君子护康颗粒醇提物(自制，四君子护康颗粒酮ⅡA的质量分数为45％)；冰片(广州化学试剂厂)；Rgl和Rbl标准品(中国药品生物制品检定所)；乙腈(色谱纯，山东禹王实业有限公司)；肠灌流液(K·R液，自制)；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。 1．3实验动物 SD大鼠，雄性，体重200～240 g，中国药科大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(苏)2007．0001。 2方法 2．1 Rgl和Rbl含量测定方法的建立 2．1．1 色谱条件 色谱柱：Shim·pack VP—ODS色谱柱(4．6 mm×150 nl／n，5 Ixm)；流动相：乙腈一0．056％磷酸水溶液(25：75，用于Rgl；35：65，用于Rbl)；流速：l mL·min～；进样量：20 ixL；柱温：28℃；检测器：SPD一10A VP紫外检测器；检测波长：204 nmo 2．1．2标准品储备液的配制 分别取干燥至衡重的Rgl和Rbl对照品各lO 1119，精密称定，甲醇溶解，并定容于10 mL容量瓶中，配得质量浓度为1 g·L一的混合标准品储备液，密闭，备用。 2．1．3标准曲线的制备精密吸取Rgl和Rbl混合标准品贮备液适量，用甲醇(或K-R液)稀释成不同质量浓度的系列标准品溶液，按ml2．1．1ml项下色谱条件，进样，记录色谱图。以Rgl和Rbl质量浓度(C，mg·L‘1)对峰面积(A)进行线性回归，求各标准品的标准曲线方程。 2．1．4精密度试验取高、中、低3个质量浓度的标准品溶液，于1天内重复进样测定5次，并分别于第l、3、5天各进样测定1次，计算峰面积的RSD，考 察日内及日间精密度。 2．1．5 回收率试验精密吸取标准品储备液适量，用甲醇(或K-R液)稀释成高、中、低3个质量浓度的标准品溶液，进样，记录色谱图。根据标准曲线方程，计算回收率。 2．2四君子汤中Rgl和Rbl的胃肠道稳定性研究取0．365 g·mL。1盐酸9 mL用蒸馏水稀释至1 L，加入胃蛋白酶使其质量分数为1％，即得人工胃液。取KH2PO。6．8 g，加水500 mL使溶解，用0．1tool·L—NaOH溶液调节pH至6．8；另取胰酶10 g，加水适量溶解；将两液混合，加水稀释至l 000 mL，即得人工肠液。将适量PNS单方及四君子颗粒剂(PNS、四君子护康颗粒醇提物和冰片按复方四君子护康颗粒方配伍)分别加入人工胃液(必要时另加适量吐温．80增溶)或人工肠液中，使PNS质量浓度为200 mg·L～，37℃水浴温孵，于0、10、30、60、120、180分钟分别取样0．5 mE(人工胃液取样中加入适量pH 6．8的磷酸盐缓冲液，以终止反应)，冰水浴冷却，高速离心，取上清液进样，测定Rgl和Rbl含量。 2．3四君子汤中R91和Rbl的肠道膜渗透性研究 2．3．1 Rgl和Rbl在K—R液中的稳定性考察用K．R液配制200 mg·L。1 PNS溶液，移取适量置于具塞离心管中，密封，放人37℃水浴中孵育150分钟，分别取孵育前后的PNS溶液进样，测定Rgl和Rbl的含量。 2．3．2硅胶管及肠壁的物理吸附考察 配制200mg·L。1 PNS的K-R溶液，水浴加热至37℃。剪取清洗后的大鼠小肠段约12 cm，用玻璃棒将黏膜层翻出，将肠段与硅胶管分别置于200 mg·L。1PNS的K．R溶液中，37℃水浴孵育3小时，分别取孵育前后的PNS溶液进样，测定Rgl和Rbl的含量。 2．3．3供试液的配制 分别将PNS与冰片、PNS与四君子护康颗粒醇提物、PNS与冰片及四君子护康颗粒醇提物按复方四君子护康颗粒方比例配伍。称取PNS及上述各配方适量，置于不同容量瓶中，加人适量K—R液，超声使溶解完全，继续用K·R液定容至刻度，使PNS质量浓度为200 mg·L～，即分别得单方、PNS+冰片二联方、PNS+四君子护康颗粒二联方、四君子颗粒剂供试液。 2．3．4大鼠在体单向灌流实验实验前将大鼠禁食12小时以上，自由饮水，腹腔注射0．2 g·mL叫乌拉坦溶液(1．2 g·kg以)麻醉，背部固定，保持37℃