大黄中蒽醌类成分的提取幻灯片.pptVIP

大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴别 * * 一、实验目的 掌握蒽醌苷元的提取方法——酸水解法。 掌握缓冲纸色谱的原理及基本操作技术。 掌握pH梯度萃取法的原理及操作技术。 通过大黄酚和大黄素甲醚的分离实验，熟悉柱色谱的操作技术。 熟悉蒽醌类化合物的鉴定方法。 二、基本原理 大黄中羟基葸醌类化合物多数以苷的形式存在，故先用稀硫酸溶液把蒽醌苷水解成苷元，利用游离葸醌可溶于热氯仿的性质，用氯仿将它们提取出来。由于各羟基葸醌结构上的不同所表现的酸性不同，用pH梯度萃取法分离它们；大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，利用其极性的差别，用柱色谱分离之。 三、操作要点 1.提取、分离流程（如图一） 2.总蒽醌苷元的提取 大黄粗粉100 g，加20％硫酸溶液300 ml润湿，再加氯仿500 ml，回流提取2hr，稍冷后过滤，残渣弃去，氯仿提取液于分液漏斗中，分出酸水层，得氯仿提取液。 图1.大黄提取分离流程图 3.蒽醌苷元的分离和精制 （1）蒽醌类成分的缓冲纸色谱试验 为了验证分离所采用的萃取液是否合理，作如下缓冲纸色谱试验：取层析滤纸3 cm×12 cm，距下端2 cm处划一起始线，向上每隔1.5 cm划一平行线，在各条带上依pH由低至高顺次涂布实际所用的各缓冲液及碱液，涂布完后，将湿滤纸夹在两片干滤纸中吸至半干。取样品总蒽醌苷元氯仿提取液点在起始线上，用氯仿上行展开，将结果绘制在下面图中，并确定选择的萃取剂是否合理。 （2）分离与精制 a.大黄酸的分离和精制 将含有总蒽醌的氯仿液450 ml于1000 ml分液漏斗中，加pH 8缓冲液150 ml充分振摇，静置至彻底分层，分出碱水层置250 ml烧杯中，在搅拌下滴加20％盐酸至pH 3，待沉淀析出完全后，过滤，并用少量水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀干燥后，样品加冰醋酸10 ml加热溶解，趁热过滤，滤液放置析晶，过滤，用少量冰醋酸淋洗结晶，得黄色针晶为大黄酸。 b.大黄素的分离和精制 pH 8缓冲液萃取过的氯仿层，用pH 9.9缓冲液300 ml振摇萃取，静置至彻底分层后，分出碱水层，在搅拌下用20％盐酸酸化至pH 3，析出棕黄色沉淀，抽滤，水洗沉淀物至洗出液呈中性，沉淀经干燥后，用15 ml丙酮热溶，趁热过滤，滤液静置，析出橙色针晶，过滤后，用少量丙酮淋洗结晶，得大黄素。 c.芦荟大黄素的分离与精制 pH 9.9萃取过的氯仿层再加5％碳酸钠-5％氢氧化钠（9:1）碱水液540 ml萃取，碱水层加盐酸酸化，析出的沉淀水洗，干燥，用10 ml乙酸乙酯精制，得黄色针晶的芦荟大黄素。 d.大黄酚和大黄素甲醚的分离 萃取除去芦荟大黄素后余下的氯仿层，再用3％氢氧化钠溶液500 m1分二次萃取，至碱水层无色为止，合并碱水层，加盐酸酸化至pH 3，析出黄色沉淀，过滤，水洗至中性，干燥，为大黄酚和大黄素甲醚混合物，留作柱色谱分离的样品。余下氯仿液水洗至中性，蒸馏回收氯仿。 e.硅胶柱色谱法分离大黄酚、大黄素-6-甲醚 装柱：用石油醚－乙酸乙酯（9.8:0.2）浸泡200～300目硅胶约20 g，搅拌均匀，尽量赶出气泡。一次性倒入1.8 cm X 28 cm 的层析柱中，轻轻敲打使硅胶均匀下沉，至硅胶界面不再下降为止。 上样：将离大黄酚和大黄素-6-甲醚的混合物用乙醇加热溶解，伴入少量硅胶，水浴60℃左右烘干，加到已装好的硅胶柱顶端，最后在样品带上盖上一层硅胶或棉花，以保护样品界面不受干扰。 洗脱：先用100 ml石油醚－乙酸乙酯（9.8:0.2）洗脱，至第一条黄色色带洗下来，再换用100 ml石油醚－乙酸乙酯（9.5:0.5）洗脱下第二条色带。 *