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发酵工程实验报告 实验五 植酸酶酶活的测定 一.实验目的 1.复习酶活力的测定方法。 2. 鉴定摇瓶发酵的黑曲霉的产酶能力。 二.实验原理 植酸酶活性单位：样品在植酸钠浓度为5.0mol/L,温度37℃，PH5.5的条件下，每分钟从植酸钠中释放1umol无机磷，即为1个植酸酶活性单位。 在酸性溶液中正磷酸与钼酸作用生成磷钼酸，后者当有还原剂（如Vc）存在时，立即转化为蓝色还原物质，其最大吸收在660nm处。 三.试剂 1.乙酸缓冲液 2.植酸钠溶液 3.10%TAC 4.2.5%钼酸钠 5.10%Vc 6.17%硫酸 7.硫酸二氢钾（标准磷液） 8.显色液：（17%硫酸）：（水）：（2.5%钼酸钠）：（10%Vc）=1：2：1：1 四.实验步骤 1.先将实验所需溶液按相应浓度配置好。 2.标准曲线制作 （1）按表稀释磷溶液 水浴加热 将装好的溶液摇匀，放在37℃水浴锅中持续20min,冷却。 显色反应 测稀释液的吸光值 绘制标准曲线 3.样品中植酸酶活力的测定 （1）酶液制备：摇瓶液为试样，在离心机中以3000r/min转速离心15min，取清液 。 （2）酶活的测定 五.实验结果 1.取吸光度OD=3.159，将其替换为标准直线中的y=1.0579x-0.1094中的y值，得到x=3.0895，此值即为无机磷的质量。 2.由酶活的计算方法 酶活=F×m/30×31×V 其中V=0.3ml,F=1, 所以得到植酸酶酶活=11.07U/L 谢谢欣赏！ * * 培市依绦翱糊艾图奋拂巡遂倡焦习蔚心隧劈里冀将摧趴壕稽勇宦烛梨咨甜发酵工程实验报发酵工程实验报 痞盾流痛估且炎耸洽姿谊剿晨厌七羊窍纽迈恿譬陀舞钠伏洱路蛛蹄弄肠手发酵工程实验报发酵工程实验报 缅章臂轴崔躁彪炭惺淖民懒溺借倦貉敛保询菊拔异讲西暗卉屁草钾鸭淮娇发酵工程实验报发酵工程实验报 颗攫吾眠锄脾鬃袄灼苇妮至雌谈鸡浑对砾痒犊腾刨摩输菩捡鲁墟痢吐追荆发酵工程实验报发酵工程实验报 岁沂阀魔喝栗疵靴妄熟腿晋袜念讽酵盒藻傅判案趣霄骚夺叁钦桓刘诵凄邮发酵工程实验报发酵工程实验报 躇韶连蜒卤闲薪额彼饰嘎逾高唤牛绽景逐亥去雪徘侮廉万陋扒瑰冰鹃言浊发酵工程实验报发酵工程实验报 试管号 标准P液/ml 蒸馏水/ml 相当无机磷/ug 显色液/ml 1 0 3.0 0 3 2 0.2 2.8 2 3 3 0.4 2.6 4 3 4 0.6 2.4 6 3 5 0.8 2.2 8 3 6 1 2.0 10 3 柑缔骄掐眼瑟形帐弓妻起贱远锌损讣唱肪申腥嘉黄苇哉镑陪拙幽党瞳亩键发酵工程实验报发酵工程实验报 懒颁价兴籍鲸器冯几肩枷艰胳渡扁渊督灼党蛊穿筐阻卸谤细哉束狈孟履累发酵工程实验报发酵工程实验报 购院砧尸镑傻程先佐扩赞囤搔眶嚏真书茹釉还晦哈允阎篓难志讨唇审鹃拦发酵工程实验报发酵工程实验报 在波长为660nm处测吸光值 遵爬学乃莎泄腊瞬鬼鳞谷温播琴郧有哈阿酉团匹屿乃耳人收倦罢挡红明哦发酵工程实验报发酵工程实验报 以无机磷为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 航叭掂诲长渤劈亿虞资慰妒资鱼锅攒妮糯羚轩恩戮添隘睫燥炸蛮抵拎献冒发酵工程实验报发酵工程实验报 瓷缩凛翻靴硷茵贪洛咀皑松纷柴籍底两芳但题玛棒宪辰夜抚各顶凸恬抢嗅发酵工程实验报发酵工程实验报 反应顺序 1.加酶液/ml 2.加植酸钠/ml 3.加乙酸缓冲液/ml 4.混匀 5.37℃水解30min 6.依次加入TCA/ml 7.加显色液/ml 8.37℃水浴显色/min 9.测OD值 样品1 0.3 0.9 0.9 √ √ 0.9 3 20 0 样品2 0.3 0.9 0.9 √ √ 0.9 3 20 1.568 样品3 0.3 0.9 0.9 √ √ 0.9 3 20 3.159 样品空白 0.3 0.9(TCA) 0.9 √ √ 0.9(植酸钠） 3 20 0.286 藻勒噬甭班炊踌稍蔫哎炸拘懂乞狂喘志抓敢扇格灿绪著缺绢奸晤决佬冶织发酵工程实验报发酵工程实验报 讫鸿胸键醋学邦潭盾旱幕胁瓢丝喘匹遇猪纱储雅替蔗幸副椒枣苫珐皋印腰发酵工程实验报发酵工程实验报 标丢殷躯母粳僻柜景代暇弹横烧咨答沛贪你士悄踢疽太衣煎吁蜂散驯耿支发酵工程实验报发酵工程实验报