组织培养技术实践实训指导书..doc

目 录 前 言 1 实训项目一　组织培养实训室设计及常用的仪器设备 1 实训项目二　实训器材的清洗、包装和灭菌技术 2 实训项目三　自然界中微生物的检查 4 实训项目四　基本培养基母液和植物生长物质母液的配制技术 4 实训项目五　培养基的配制与灭菌技术 6 实训项目六　外植体灭菌与无菌操作技术 7 实训项目七　胡萝卜块根愈伤组织诱导技术 8 实训项目八　月季的茎段培养技术 9 实训项目九　山芋良种的脱毒苗培养技术 10 实训项目十　试管苗的继代培养技术 11 实训项目十一　试管苗的驯化和移栽技术 12 前 言 《组织培养》是一门理论性、技术性和实践性强的的课程，通过本课程的学习，要求学生掌握植物组织培养基础知识、基本理论和基本技术。重点是植物的快速繁殖技术组培苗工厂化生产技术。并紧紧围绕培养高等应用型技术人才，以强化技术应用能力培养为主线，着眼于培养学生应职岗位综合能力和创新精神，提高学生实践动手能力、科学实验能力、技术推广与市场开拓能力和组培苗工厂化生产经营与组织管理能力。本课程的实训方式是改变传统实践教学模式，以职业技能培养为目标，以综合性职业技能项目为载体，减少验证性实训，加大职业技能训练，把实训落到实处。优点是操作方便自如，比较舒适，工作效率高，准备时间短。开机10分钟即可操作，可进行长时间使用。在工厂化生产中，接种工作量很大，需要经常长久地工作时，超净台是很理想的设备。超净台功率在145－260W左右，它装有小型鼓风机，使空气穿过一个前置过滤器，在这里把大部分空气尘埃先过滤掉，然后再使空气穿过一个细致的高效过滤器，它除去了大于03μm的尘埃、细菌和真菌孢子等，最后以较洁净的气流吹到工作台面。超净空气的流速为每分钟24－30m，这已足够防止附近空气袭扰而引起的污染，这样的流速也不会妨碍采用酒精灯对器械等的灼烧消毒。在这样的无菌条件下操作，就可以保证无菌材料在转移接种过程中不受污染。超净台分水平式和垂直式二种型号。1.05kPa时，湿度可达121℃。高压蒸汽灭菌法就是利用高压和高热释放的潜热进行灭菌，为目前可靠而有效的灭菌方法。适用于耐高温、高压，不怕潮湿的物品，如敷料、手术器械、药品、细菌培养基等。 高压蒸汽灭菌锅使用注意事项： （1）高压灭菌锅使用前要水加到水位线； （4）达到规定的灭菌时间后，关闭电源，当压力指针降至 0时，方可开启锅盖。 汽未放尽前，不得开启高压锅； 压力表指针在0.05MPa以上时，不能过快放汽，以防止压力急速下降，液体滚沸，从培养容器中溢出。、操作过程，请注意安全，小心烫伤。在植物组织培养工作中，配制培养基是日常必备的工作。为简便起见，通常先配制一系列母液，即贮备液。所谓母液是欲配制液的浓缩液，这样不但可以保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取，而且还便于低温保藏。一般母液配成比所需浓度高10－100倍。母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。1、母液的配制（1）母液的配制用电子天平称取药品，分别放入烧杯。用少量蒸馏水将药品分别溶解，然后依次混合。定容：加蒸馏水定容至1000ml成倍液。（2）母液的配制用电子天平称取药品，分别放入烧杯。用少量蒸馏水将药品分别溶解，然后依次混合。定容：加蒸馏水定容至1000ml成倍液。（3）母液3的配制称量：用电子天平称取下列药品，分别放入烧杯。Na2-EDTA 1.85g FeSO4.7H2O 1.39g混合：用少量蒸馏水将药品分别溶解后混合。定容：加蒸馏水定容至500ml成100倍液。（4）母液的配制用电子天平称取药品，分别放入烧杯。用少量蒸馏水将药品分别溶解，然后依次混合。定容：加蒸馏水定容至1000ml成倍液。（）植物生长调节物质母液的配制称量：用电子天平称取生长素细胞分裂素100mg。溶解：用少量95%的酒精或0.1mol/L的NaOH溶，生长素细胞分裂素溶解。定容：加蒸馏水定容至100ml配制成1mg/的。2、母液的保存（1）装瓶：将配制好的母液分别倒入瓶中，贴好标签，注明培养基名称、母液倍数配制日期。（2）储藏：将母液瓶放在冰箱中备用。1M的NaOHHCl液按表用量筒移取大量元素母液ml，用专一对应的移液管分别吸取微量元素母液 ml、铁盐母液0ml、有机物母液0ml，均置1M的NaOHHCl将PH值调至5.8-6.0。 6.分装 待培养基稍稍冷却时，即可分装，三角瓶或果酱瓶装量为35毫升/瓶。 7.果酱瓶、三角瓶用专用的封口膜封口。 8.灭菌 将培养基至于高压灭菌锅内，注意不能装的太挤，于121℃保温20分钟。 五、实训报告： 1.每组配制2000mlMS培养基，并分装在培养容器中。 2. 调PH值注意哪些问题？ 实训项目六　外植体灭菌与