育种实验-花粉生活力的测定2011春.pptVIP

园艺植物育种学实验 2011.4 实验一 花粉生活力的测定 一、目的和要求 二、材料及用具 三、方法 四、注意事项 五、作业 一、目的和要求 花粉生活力——在正常条件下花粉在雌蕊柱头上萌发的能力。 花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。 本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的方法。 二、材料及用具 材料：梨的花粉。 用具：显微镜、盖玻片、载玻片、凹式载玻 片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、 玻璃棒、微波炉 试剂：I-KI溶液、蒸馏水、蔗糖、琼脂等。 三、方法 （一）花粉贮藏 从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内阴干，令其开裂，花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。再把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。 （二）花粉生活力试验 经贮存的花粉,在使用之前必须作生活力的测定以鉴定其质量。 测定花粉生活力的方法主要有三种。 活体萌发法 离体萌发法 染色法 1、花粉发芽法 人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱。 （1）培养基的制作与接种 一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用头发（接种针或解剖针）沾以少量花粉。条播（轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养基上），将载玻片放在垫有湿润棉花培养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签写明处理、种类、播种日期，将培养皿放于(20_25℃)的恒温箱中培养。 1、花粉发芽法 （2）观察记数 在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过几个小时即可观察到已经发芽，慢的需24小时以上） 若发现花粉已发芽时，便按一定方向，就同一视野中用记数器记录花粉粒总数和发芽数，观察记录3～5个显微镜视野的数字，求其平均数，即得出花粉发芽百分率。 花粉发芽的标准，以花粉管伸长超出花粉直径为准。 2．碘-碘化钾染色法 原理： 正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则少。 据此，可用化学物质染色，根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。 通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良畸形花粉则不积累淀粉，当I-KI染色时呈黄褐色。 2．染色法 步骤和方法： 取花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一滴I-KI溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察。 凡被染色呈蓝色表示具有生活力，呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉。 为了确定具有生活力的花粉百分率，要连续观察3～5个视野，求其平均值，将观察结果填入表内。 四、作业 1．绘出花粉发芽前后形态图。 2．统计几种测定方法花粉发芽率。 3．将发芽法与染色法测定的结果作一比较，分析其差异原因。 * * 三、方法