农药残留检测技术(课件)解读.pptVIP

农药残留快速测定技术  2012年 2011年 2010年 农残快速测定方法及仪器介绍 一、农药残留简述 二、快速检测方法及相关仪器 三、农残速测仪介绍 一、农药残留简述 1、农药残留相关名词 农药分类 农药残留：农药使用后残存在生物体、农副产品和环境中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。以mg/kg、ug/kg、ng/kg表示。 农药残留的危害：农药若大量残留在农副产品表面会引起人的神经传导阻碍、神经麻痹甚至引起死亡。 最大残留限量：在农副产品中农药残留的法定最高允许浓度，又称最高残留限量，以每千克农副产品中农药残留的毫克数（毫克/千克）表示。 我国违禁农药：666DDT、毒鼠强、甲胺磷、甲基对硫磷、对硫磷、久效磷、磷胺等高毒农药全面禁止使用 2、国家农药残留速测检测标准 NY/T 448-2001 蔬菜上有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测方法 GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测 二、快速检测方法及相关仪器 1、速测卡法（纸片法） 胆碱酯酶可催化靛酚乙酸酯（红色）水解为乙酸与靛酚（蓝色），有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱酯酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。 2、酶抑制率法（分光光度法） 在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。 目前使用的快速检测仪器 仪器原理：酶抑制率法（分光光度法） 使用此方法的仪器有： 深圳安鑫宝WT系列农药残留速仪 长春吉大·小天鹅GDYN-110SB农残速测仪 上海博纳CL-BIII八通道残留农药测定仪 等 特点： ?精确度高、稳定性强 ?易于操作 三、农残速测仪介绍 （一）原理 农药对胆碱酯酶（检测试剂）的活性有抑制作用，这样就抑制了胆碱酯酶催化显色剂水解发生显色反应，通过对显色反应的测定来实现农药残留量的测量。由此可判定果品蔬菜样品中的残留农药的含量。 正常情况： 底物+胆碱酯酶---水解→胆碱 胆碱+显色剂 →→→黄色溶液 （二）抑制率计算方法 通过测定果蔬中的残留农药使乙酰胆碱酯酶活性变化的程度来测定样品果蔬中的此类残留农药毒性，仪器测定的残留农药大小用“抑制率”来表示。抑制率是农药对酶抑制程度的显示指标，其计算方式为: ??? I = ((A0-At)/A0)×100％ I ——— 抑制率 A0 ——— 对照的吸光度值 ??? At ——— 样品溶液的吸光度值 （三） GB/T 5009.199-2003方法介绍 1、配试剂 缓冲液、酶试剂、显色剂、底物均按照仪器自带 的使用说明书的要求配制而成（所用水为蒸馏水或纯 净水）。除缓冲溶液可常温放置，其他试剂配置后必 须0-4℃避光保存，使用前冷却至室温，保存期不宜过 长，一般现配先用。  2、实验操作 空白样操作步骤及要求： ①取2.5ml缓冲溶液加入试管中（记录）。 ②分别加入0.1ml酶液（记录），0.1ml显色剂（记录）至试管中。 ③摇匀后于37℃放置15min（计时）。 ④加入0.1ml底物（记录）至试管中摇匀，此时检液起显色反应，应立即放入仪器比色池中检测。 ⑤注意比色皿光面毛面的放置方向。按对照检测键，3min后记录空白样的△AC值。 样品样的操作步骤及要求： 取样步骤及要求： ①称取菜样1g〔要求一种菜样要从不同植株取样，从叶片部位取（果实蔬菜用刀顺皮削下），剪成1cm左右见方碎片，混匀后用镊子称取1g（记录），放入烧杯或提取瓶中（编号）〕。 ②取5ml缓冲溶液加入编好号的样品瓶中（记录）。 ③用手或借助仪器振荡1-2min（计时）。 ④振荡完成后静置3-5min（计时）。 ⑤试管中加入2.5ml样品提取液。 ⑥再分别加入0.1ml（100ul）酶液，0.1ml显色剂至各样品样的试管中。 ⑦摇匀后于37℃放置15min（计时）。 ⑧各样品样中加入0.1ml底物摇匀。 ⑨最后将每个试管中的样品液倒入比色皿中，迅速放入仪器中，按样品检测键，3min后记录实验结果。 3、结果的判定 结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时，样品为阳性结果农药残留