【2017年整理】ca2+浓度对罗氏沼虾Gq蛋白α亚基亚细胞定位的影响.docVIP

ca2+浓度对罗氏沼虾Gq蛋白α亚基亚细胞定位的影响 摘要：采用免疫胶体金电镜技术研究光暗适应条件下不同ｃａ２＋浓度对罗氏沼虾（macrobrachium rosenbergi）感光细胞中ｇｑ蛋白α亚基亚细胞定位的影响。结果表明，对于光适应组，在高ｃａ２＋溶液、生理溶液和低ｃａ２＋溶液中细胞质与感杆束中胶体金密度的比值是３．５１、２．１３和０．９３。对于暗适应组，在高ｃａ２＋溶液、生理溶液和低ｃａ２＋溶液中细胞质与感杆束中胶体金密度的比值是３．０１、１．０８和０．４７。这些表明了罗氏沼虾感光细胞中ｇｑ蛋白α亚基在暗适应条件下同时分配在感杆束和细胞质中。在光照和细胞质内ｃａ２＋浓度适度升高的条件下，膜结合的ｇｑ蛋白α亚基进而转化为可溶性的ｇｑ蛋白α亚基。 关键词：罗氏沼虾（macrobrachium rosenbergi）；感光细胞；ｇｑ蛋白；ｃａ２＋；免疫胶体金电镜 ａｂｓｔｒａｃｔ：ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃａ２＋ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｎ ｓｕｂｃｅｌｌｕｌａｒ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｑ ｐｒｏｔｅｉｎ α ｓｕｂｕｎｉｔ ｉｎ ｔｈｅ ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｅｌｌ ｏｆ ｍａｃｒｏｂｒａｃｈｉｕｍ ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｉ ｗｉｔｈ ｌｉｇｈｔ ａｎｄ ｄａｒｋ ａｄａｐｔａｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｕｓｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ． ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｕｎｄｅｒ ｌｉｇｈｔ ａｄａｐｔａｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ， ｔｈｅ ｄｅｎｓｉｔｙ ｒａｔｉｏ ｏｆ ｔｈｅ ｇｏｌｄ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ ｒｈａｂｄｏｍ ｔｏ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ｉｎ ｍ． ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｉ ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｅｌｌ ｉｎ ｈｉｇｈ ｃａ２＋ ｓｏｌｕｔｉｏｎ， ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｏｗ ｃａ２＋ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ３．５１， ２．１３ ａｎｄ ０．９３， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． ｍｅａｎｗｈｉｌｅ， ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｕｎｄｅｒ ｌｉｇｈｔ ａｄａｐｔａｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｉｎ ｈｉｇｈ ｃａｌｃｉｕｍ ｓｏｌｕｔｉｏｎ， ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｏｗ ｃａｌｃｉｕｍ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｗａｓ ３．０１， １．０８ ａｎｄ ０．４７， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ， ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｔｈａｔ ｇｑ pｒｏｔｅｉｎ α ｓｕｂｕｎｉｔ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｂｏｔｈ ｏｎ ｔｈｅ ｒｈａｂｄｏｍ ａｎｄ ｃｙｔｏｐｌａｓｍ ｉｎ ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｅｌｌ ｏｆ ｍ． ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｉ ｕｎｄｅｒ ｄａｒｋ ａｄａｐｔａｔｉｏｎ． ｔｈｅ ｍｅｍｂｒａｎｅ－ｂｏｕｎｄ ｇｑ ｐｒｏｔｅｉｎ α ｓｕｂｕｎｉｔ ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｉｎｔｏ ｓｏｌｕｂｌｅ ｇｑ ｐｒｏｔｅｉｎ α ｓｕｂｕｎｉｔ ｕｎｄｅｒ ｌｉｇｈｔ ａｎｄ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｈｉｇｈ ｃａ２＋ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ． ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｍａｃｒｏｂｒａｃｈｉｕｍ ｒｏｓｅｎｂｅｒｇｉ； ｐｈｏｔｏｒｅｃｅｐｔｏｒ ｃｅｌｌ； ｇｑ ｐｒｏｔｅｉｎ；ｃａ２＋； ｉｍｍｕｎｏｇｏｌｄ ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｍｉｃｒｏｃｏｐｙ 免疫胶体金电镜是研究生物大分子在亚细胞水平的定位、进一步探讨大分子功能的最重要技术之一，ｉｇｇ具有双价性，它的一臂可结合到事先包被有抗原的胶体金上，也可以把抗体分子包被在胶体金上对细胞内的抗原进行定位。该技术首先用胶体金颗粒对抗原的抗体进行标记，然后用标记抗体对组织超薄切片进行免疫反应，有抗原存在的细胞结构即被胶体金颗粒标记，在电镜下根据胶体金颗粒的分布情况及密度即可确定抗原的亚细胞分布及相对含量。近年来胶体金探针己成为定位和分析多种蛋白质、多肽、多糖的有力工具，特别是在抗原酶及激素等物质的细胞免疫化学定位中更加显示了其独特的作用。 罗氏沼虾（macrobrachium rosenbergi）感光细胞中ｇｑ蛋白α亚基有可溶性和膜结合两种形式［１，２］，ｇｑ蛋白α亚基在光感觉生理中的作用不仅取决于不同形式ｇｑ蛋白α亚基含量的变化，而且与其在细胞内的分布密切相关［３－５］。采用生理生化的方法能测定不同形式ｇｑ蛋白α亚基的含量，而采用免疫定位可以反映其细胞及亚细胞分布变化。采用免疫胶体金电镜技术研究光暗适