影响体细胞胚胎文化的Chorisia Speciosa的因素.docVIP

摘 要 为使美丽异木棉快速且高品质的繁殖，掌握影响美丽异木棉愈伤组织体细胞培养的因素，进行了美丽异木棉愈伤组织体细胞胚胎培养试验。试验结果表明，美丽异木棉植物体细胞胚的培养，第4次继代培养美丽异木棉胚性愈伤组织产生率最高，为16%；平板培养出现愈伤组织的概率为8.3%Factors Effecting Somatic Embryo Cultures of Chorisia Speciosa Song Yiyang Abstract: In order to mastering the effecting factors of somatic embryo cultures of Chorisia speciosa. To propagating rapid and high quality.，An experiment was implemented about Somatic embryo cultures of Chorisia speciosa. The test results show that the Chorisia speciosa plant cultivation of somatic embryogenesis, fourth successive transfer culture beautiful vision kapok embryonic callus have the highest rate, 16%; The Plate culture appears the probability of callus was 8.3%. Key word: Chorisia speciosa tissue culture Factors Effecting  1 引言 　　Chorisia speciosa）又称南美木棉木棉科异木棉属高10-15米，春季种子成熟。2]。 美丽异木棉在我国的繁殖问题仍旧是我国美丽异木棉方向需要重点解决的问题之一。愈伤组织体细胞胚培养的培养周期较短，能大量快速的培养结构完整且性状较为单一的植物体。愈伤组织体细胞胚培养在细胞水平上进行遗传操作为高等植物品种改良提供了可靠的依据和有效途径。此次实验通过美丽异木棉愈伤组织体细胞胚培养的方法对美丽异木棉进行培养研究，以期找出美丽异木棉快速且稳定繁殖的方法。 2 材料与方法 2.1 植物材料 供试材料：来自肇庆地区的美丽异木棉，取成年树上的嫩枝进行离体培养所产生的愈伤组织作为实验材料。 2.2 方法 2.2.1 取材 取肇庆地区美丽异木棉离体培养所产生的愈伤组织进行细胞悬浮培养。 2.2.2 组织培养 培养基的配方： ⑴MS+1mg/ml6-BA+0.3mg/mlNAA+0.1mg/mlTDZ+3%蔗糖+0.8%琼脂（pH5.8） ⑵ MS+1mg/ml6-BA+0.3mg/mlNAA+0.1mg/mlTDZ+3%蔗糖 (pH5.8) 美丽异木棉愈伤组织的继代： ①取一瓶木棉愈伤组织，拧开盖子前在酒精灯上烤瓶盖30s左右，打开盖子，烘烤瓶口30s.取一瓶培养基，用同样方法处理。 ②取一块木棉愈伤组织迅速夹到新的培养基中。此步骤需在靠近火焰处完成，但要注意防止愈伤被高温烫死。 ③将愈伤组织放到培养基（配方⑴）上后便可以封盖，消毒步骤同①。 ④20D后观察继代。 美丽异木棉细胞悬浮培养： ①用镊子夹取在固体培养基上继代产生的胚性愈伤组织，接种在培养基（配方（2）120r/min，温度为26℃，黑暗培养。 ②用移液枪吸取1ml的悬浮培养物转入至新鲜培养基（配方②）中，每隔4D继代一次，放入摇床，进行培养。连续培养3代后逐渐形成稳定的细胞系 美丽异木棉平板培养： ①将已灭菌温热的培养基（配方①）倒在培养皿中 ②用移液枪吸取1ml的木棉愈伤悬浮培养液，置于培养基表面，密封，培养 ③定期进行观察。 3 结果与分析 3.1美丽异木棉植物愈伤组织的转接 用配方⑴的培养基进行培养，初期20天后出现胚性愈伤组织（多为分散性较好、较为疏松的愈伤组织，颜色多为嫩黄嫩绿，如图1）。在此次试验期间共进行了10次美丽异木棉的转接，胚性愈伤组织发生率出现差异。 图1 胚性愈伤组织 3.1.2继代次数对美丽异木棉愈伤组织的影响 表1 美丽异木棉继代次数情况表 继代次数(次) 接种数（瓶） 成活数（瓶） 出现胚性愈伤组织数（瓶） 成活率（%） 胚性愈伤组织发生率（%） 1 90 40 2 44.44 5 2 40 23 2 57.5