【2017年整理】《微生物培菌工》技能训练指导书.docVIP

《微生物培菌工》技能训练指导书 江苏食品职业技术学院生物工程系编制 二○○四年四月 微生物培菌工技能训练指导书 一、微生物实验室主要设备与样品采集 （一）实验室主要仪器设备 1、光学显微镜及镜检仪器：光学显微镜、接目测微尺、接物测微尺、血球计数器、测微网、显微镜灯、日光灯等照明设备。 2、消毒、灭菌设备：高压蒸汽灭菌锅、铝锅、干燥箱、电炉、酒精灯、喷雾器、紫外光灯等。 3、微生物培养设备；恒温培养箱、液体培养振荡器、培养皿、三角瓶、试管等。 4、微生物分析设备和仪器：无菌室、无菌操作箱、超净工作台、振荡器、混合器、组织捣碎器、高速离心机、天平、接种针、接种环、镊子、剪刀、仪器盘、平皿、吸管、载玻片、盖玻片、广口瓶、试管架、特种蜡笔、记号笔、纱布、铁丝筐等。 5、菌种保藏设备：冰箱。 6、霉菌毒素一般测试仪器：层析缸、电动吹风机等。 7、专项仪器：恒温水浴锅、注射器、涂布棒、放大镜、自动温度计、自动湿度计等。 8、采样工具：铲子、匙、采样器、塑料袋等。 9、通风设备：通风橱、无菌室通风设备等。 （二）微生物学检验的样品采集 1、样品采集的目的 样品的采集简称采样。采样是从生产和经营的产品中，按照采样规定采集检验样品的过程。通过对检样的微生物学检验，可以准确评价产品状况，并为保证产品质量改进管理提供依据。 2、样品采集的要求 采集样品的基本要求是：第一，样品必须具有代表性。第二，样品要妥善存放，严防污染。第三，样品必须及时送检和检验。 采样前，应事先准备好经过灭菌的容器和采样工具。在无菌条件下，按国家有关样品采集标准均匀而准确地取样，使样品具有正确性和代表性。存放样品，应用灭菌后的纸袋或玻璃器皿为好，通常不宜直接使用塑料袋存放。采集后的样品，必须及时封口，做好记录，贴上标签，每件样品必须标记清楚（如样品名称，采样地点，时间，储藏情况，数量，食用或中毒情况。采集或送检单位及姓名，采样现场的温度、湿度及卫生状况等）。尽量保持样品的原始状态，是保证检验结果准确性的基本条件。 微生物学检验还必须具有及时性。样品送到微生物检验室应越快越好，有一般不超过３小时，如果路途遥远，可将样品保持在0―5℃环境中。 3、样品采集的方法 (1)采样用具 宜选用耐消毒灭菌的材料。使用前，应进行认真清洁干燥和相应的灭菌处理。湿热灭菌121℃至少20分钟，干热灭菌170℃至少1小时。不能用消毒剂消毒，样品中也不得加入防腐剂，以免影响检验结果的准确性。采样时应严格遵守无菌操作。 (2)采样方法与步骤 在无菌操作条件下，按有关国家规定标准采集样品：样品是固体粉末，应边取边混合；是液体，则通过振荡可混匀；检样是冷冻食品，应保持在冷冻状态（可放在冰内，冰箱的冰盒内或低温冰箱内保存）；非冷冻食品须在0―5℃环境中保存。采样数量按国家有关规定执行。 二、微生物的镜检技术 （一）普通光学显微镜的使用和保养 1、普通光学显微镜的构造和性能 光学显微镜主要由光学系统和机械系统两部分组成。光学系统是应用光学原理经过透镜使被检物体的物象放大。机械系统具有支架作用，并有调节装置。 (1)光学系统 显微镜的光学系统主要有物镜和目镜组成。此外，还有反光镜、聚光镜等。 1)物镜 物镜是由多组透镜组成，分为干燥系和油浸系两组镜头。干燥系镜头是指镜检时物镜和镜检物之间的介质空气的物镜，通常可分为两种：一是低倍镜，二是高倍镜。油浸系镜头是指镜检时物镜和镜检物之间的介质是折光率玻片和镜头相似的油类（如香柏油），镜头浸入油中而进行调焦镜检的镜头，这样可避免光线通过空气时发生散射现象，从而保证视野亮度，提高镜头分辨率。 2)目镜 目镜装在镜筒上方，它是由两块透镜组成，它可将物镜所造成的实像进一步放大形成虚像，并映入眼部。目镜不增加分辨率。 显微镜的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，但从提高分辨率的实际效果来看，还是选用放大倍数较高的物镜为好。 3)聚光镜 聚光镜一般由两个或几个透镜组成，它可以使光线从正面和斜面照射到标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，以提高物镜的分辨率。 4)反光镜 它是普通光学显微镜的取光设备，装置在镜座上。它是个双面镜子，一面是平面镜，另一面是凹面镜，镜体可在弧弓上自由翻转以调整位置，使光线射向聚光镜。 5)光源 自然光线和灯光均可作为光源，以灯光较好，因为光色和强弱都可以得到控制。 (2)机械系统 显微镜的机械系统主要由镜座、镜臂、镜筒、调节器、转换器、载物台和标本推动器等部件组成。 1)镜座 镜座是显微镜的基座，在镜体的底部，用以支持整个镜体。 2)镜臂 镜臂是显微镜的脊梁，机械装置一般都直接或间接地与其相接，用以支撑与连接镜筒和镜座。 3)镜筒 镜筒上端安装目镜，下端连接转换器。 4)转换器 转换器是由两