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免疫室作业指导书 文件编号：KPJY-MY-2-1-52 第A版 编制： 高婷婷 审核： 周春玲 批准： 周春玲 生效日期：2009年5月8日 康平县人民医院检验科 目 录 序号 主 题 内 容 代 号 页 号 1 血清乙型肝炎病毒表面抗原检测 KPYY-MY-01 6 2 血清乙型肝炎病毒表面抗体检测 KPYY-MY-02 9 3 血清乙型肝炎病毒e抗原检测 KpYY-MY-03 12 4 血清乙型肝炎病毒e抗体检测 KPYY-MY-04 15 5 血清乙型肝炎病毒核心抗体检测 KPYY-MY-05 18 6 甲型肝炎病毒--IgM检测 KPYY-MY-06 21 7 血清丙型肝炎病毒抗体检测 KPYJY-MY-07 24 9 人类免疫缺陷病毒抗体检测 KPYY-MY-09 31 10 梅毒螺旋体特异性抗体检测 KPYY-MY-10 36 11 类风湿因子（RF）测定 KPYY-MY-11 39 12 抗链球菌溶血素O（ASO）测定 KPYY-MY-12 42 13 C反应蛋白（CRP）测定 KPYY-MY-13 45 14 支原体肺炎血清学试验 KPYY-MY-14 48 15 D二聚体检测（胶乳凝集法） KPYY-MY-15 51 16 甲胎蛋白（AFP）定量测定 KPYY-MY-16 54 17 癌胚抗原（CEA）定量测定 KPYY-MY-17 56 18 T-PSA定量测定 KPYY-MY-19 60 21 肌钙蛋白-I定量测定 KPYY-MY-22 72  修 订 页 序号 文件编号 页码 需更改的内容 更改内容 批准人 批准日期 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21  血清乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA） 原理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗（HBsAg）。 标本采集 采集前病人准备：受检者应空腹 标本种类：血清或血浆 标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。 标本储存：2-8℃保存不应超过，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。 标本运输：密封，室温运输。 标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。 试剂 试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒 试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。 包装规格：96Test/Kit 试剂盒组成： HBsAg微孔板，HBsAg酶标记抗体，HBsAg阳性对照血清，HBsAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，自封袋。 试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期9个月。 仪器设备 仪器名称：自动酶标仪 仪器厂家： 仪器型号： 操作步骤 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。编号：将微孔条固定于支架，按序编号。加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各50?l于相应孔中。加酶：分别在每孔中加入酶标记抗体50?l，轻拍混匀。温育：置37℃温育60分钟，室温平衡5分钟。 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。显色：每孔加入底物A、B各50?l，轻拍混匀，置37℃暗处15分钟。终止：每孔加终止液50?l，混匀。测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。 结果判断与分析 临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔OD值N×2.1，阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验，小于0.05时以0.05计算。结果判定：样品OD值S/C.O=1者为HBsAg阳性 样品OD值S/C.O1者为HBsAg阴性质量控制 每用含2ng/mlHBsAg的质控血清同步检测，以S/CO值绘制质控图，S/CO值应在控制范围内