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【题型】
名词解释 10个 20分;
单选 15个 30分;
填空 10题(30空) 15分;
简答题 5个 25分;
流程分析 10空 10分;
附加题 1个
【复习重点】
生物及中药材料,组织和细胞的常用破碎方法?
答:机械法(匀浆法、珠磨法、超声法)、物理法(干燥法、冻融法、渗透压冲击法)、化学法(化学试剂处理、制成丙酮粉)、生物法(酶解法、组织自溶法)
PEG浓缩、Sephadex浓缩的差别?
答:虽然两法都是利用这两种高分子物质很强的吸水性,但其还有很多不同,①两法运用的技术不同,PEG运用的是膜分离技术中的透析法,而Sephadex运用的是凝胶层析技术。②操作方法不同:PEG浓缩:使用聚乙二醇时,先将溶液装入半透膜的袋内,扎紧袋口,外加聚乙二醇覆盖,袋内溶剂渗出即被聚乙二醇吸去。Sephadex浓缩:凝胶可直接投入待浓缩的溶液中,溶剂和小分子被吸收到凝胶内,大分子留在溶液中,然后离心过滤。凝胶可直接投入待浓缩的溶液中,缓慢搅拌30min,葡聚糖凝胶吸水膨胀,溶剂和小分子被吸收到凝胶内,大分子留在溶液中,然后离心过滤。每次葡萄糖凝胶的加入量为溶液量的1/5为宜。③浓缩效果:PEG浓缩:在极短时间内,可以浓缩几十倍至上百倍。Sephadex浓缩:浓缩过程需要重复数次,每次需缓慢搅拌30min,可能过程比较繁琐,但其也可在短时间内使溶液浓缩。
冷冻干燥的原理及操作步骤?
答:原理:由物理学可知,水有三相,O点为三相共点,OA为冰的融解点。根据压力减小、沸点下降的原理,只要压力在三相点压力之下(图中压力为 646.5Pa以下,温度0℃以下),物料中的水分则可从水不经过液相而直接升华为水汽。根据这个原理,就可以先将食品的湿原料冻结至冰点之下,使原料中的水分变为固态冰,然后在适当的真空环境下,将冰直接转化为蒸汽而除去,再用真空系统中的水汽凝结器将水蒸汽冷凝,从而使物料得到干燥。这种利用真空冷冻获得干燥的方法,是水的物态变化和移动的过程,这个过程发生在低温低压下,因此,冷冻干燥的基本原理是在低温低压下传热传质的机理。
操作步骤:制品准备、预冻、一次干燥(升华干燥)、二次干燥(解吸干燥)、密封保存
Ks盐析法与β盐析法的区别?
答:①定义不同:在一定的pH和温度下改变离子强度(盐浓度)进行的盐析,称作KS盐析法。在一定离子强度下仅改变pH和温度进行盐析,称作β盐析。②适用阶段不同:KS盐析法适用于前期分离操作,β盐析用于分离后期阶段。③分辨率不同:KS盐析法由于往往是向提取液中加入固体中性盐或其饱和溶液,以改变溶液的离子强度,使目的物或杂蛋白沉淀析出。这样做使被盐析物质的溶解度剧烈下降,易产生共沉淀现象,故分辨率不高;β盐析法由于溶质溶解度变化缓慢且变化幅度小,沉淀分辨率比KS盐析法好。
常见吸附剂的性质及在不同介质中吸附能力的大小?
答:吸附剂按其化学结构可分为两大类:一类是有机吸附剂,如活性炭、淀粉、聚酰胺、纤维素、大孔吸附树脂等;另一类是无机吸附剂,如白陶土、氧化铝、硅胶、硅藻土、碳酸钙等。
性质:见P175-
速度区带离心、等密度区带离心定义及差别?RCF计算公式?离心机分类及转子类型?
答:速度区带离心:又叫速率区带离心法或分级区带离心法。离心操作时将样品液置于连接或不连续性或非线性密度梯度液上,控制离心时间,使所需组分穿过部分梯度液,形成的分离区带在达到其等密度区之前即停止离心。
等密度区带离心:是一种“离心平衡法”,它是离心力作用下,不同密度的多组分颗粒在梯度介质中“向上”或“向下”移动。当移动至其密度与介质密度相等的位置便不再移动,形成静止区-即“达到”离心平衡。区带的位置即该组分的“等密度点”。
差别:见P311
离心机分类:①按转速高低及是否有冷冻来分:普通离心机(无冷冻装置或水冷盘管)、高速离心机(采用水冷或具冷冻装置)、超速离心机(具真空系统及冷冻装置)②按结构分类:台式离心机、立式离心机、沉降离心机、转头式离心机、电动式离心机③按工作性质分类:制备型离心机、实验室离心机④
按操作方式分类:连续离心机、人工卸料离心机
转子类型:角度转子、水平转子、区带转子、垂直转子、连续离心转子、细胞洗脱转子。
简述膜分离技术的特点?透析袋处理及保存方法,操作注意事项?
答:特点:优点:①高效②节能③分离装置简单,操作方便④分离系数大,运用范围广⑤适合热敏物质的分离⑥工艺适应性强⑦无污染。缺点:①膜分辨率不高②在样品不太干净时,分离效果不好③价格比较高④耐药性、耐热性、耐溶性有限
处理方法:商品透析管膜常涂甘油以防破裂,并含有极其微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质。他们对蛋白质和其他生活物质有害,用时必须除去。先用50%乙醇慢慢煮沸1h,再分别用50%乙醇、0.0
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