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糖、氨基酸和蛋白质的鉴定糖一、糖的鉴定 糖类化合物：又称碳水化合物，是多/wiki/%E7%BE%9F%E5%9F%BA羟基/wiki/%E9%86%9B醛或多羟基/wiki/%E9%85%AE酮及其/w/index.php?title=%E7%BC%A9%E8%81%9A%E7%89%A9action=editredlink=1缩聚物和某些/wiki/%E8%A1%8D%E7%94%9F%E7%89%A9衍生物的总称，一般由碳、氢与氧三种元素所组成。实验目的：（1）进一步了解糖的化学性质；（2）掌握鉴定糖的方法及其原理。（一）-萘酚试验（Molish)糖类化合物一个比较普遍的定性反应是Molish反应。即在浓硫酸存在下，糖与-萘酚(Molish试剂）作用生成紫色环。实验方法 取3支试管，编号，分别加入0.5 mL 0.5%的各待测糖水溶液，滴入2滴Molish试剂（ -萘酚的乙醇溶液），摇匀。把试管倾斜450，沿管壁慢慢加入约1mL浓硫酸（切勿摇动），小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化。硫酸在下层,试液在上层样品：葡萄糖、蔗糖及淀粉样品葡萄糖蔗糖淀粉滤纸浆现象有紫色环有紫色环无无解释: 糖被浓硫酸脱水生成糠醛或糠醛衍生物，后者进一步与-萘酚缩合生成紫红色物质，在糖液和浓硫酸的液面间形成紫色环。（二） Fehling试验（1）实验原理 Fehling试剂：含有硫酸铜和酒石酸钾钠的氢氧化钠溶液。 硫酸铜与碱溶液混合加热，生成黑色的氧化铜沉淀。若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。为防止铜离子和碱反应生成氢氧化铜或碱性碳酸铜沉淀，Fehling试剂中需加入酒石酸钾钠，它与Cu2＋形成的酒石酸钾钠络合铜离子是可溶性的络离子。（2）操作方法 取4支试管，编号，分别加入Fehling试剂I和II 各0.5mL。摇匀并置于水浴中微热后，分别加入5滴待测糖溶液，振荡后置于沸水浴中加热2 ~ 3min，取出冷却，观察颜色变化及有无沉淀析出。Fehling试剂 I：称取3.5 g硫酸铜溶于100 mL蒸馏水中, 得淡蓝色的 Fehling试剂 I。Fehling试剂 II：将17g酒石酸钾钠溶于20mL热水中，然后加入20 mL含 5 g NaOH的水溶液，稀释至100 mL得无色透明的 Fehling试剂 II。样品：葡萄糖、果糖、蔗糖及麦芽糖样品葡萄糖果糖蔗糖麦芽糖现象蓝色-无色-砖红色沉淀蓝色-无色-砖红色沉淀蓝色溶液,一直无现象蓝色-无色-砖红色沉淀解释: 硫酸铜与碱溶液混合加热，生成黑色的氧化铜沉淀。若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。（三） Benedict试验（1）实验原理：Benedict试剂是Fehling试剂的改良。Benedict试剂利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂。Benedict试剂： 取17.3 g柠檬酸钠和10 g 无水碳酸钠溶于80 mL水中，再取1.73 g结晶的硫酸铜溶解在10 mL水中，慢慢将此溶液加入上述溶液，用水稀释至100 mL得Benedict试剂。（2）操作方法用Benedict试剂代替Fehling试剂 重复以上实验，取4支试管，编号，分别加入Benedict试剂0.5mL。摇匀并置于水浴中微热后，分别加入5滴待测糖溶液，振荡后置于沸水浴中加热2 ~ 3min，取出冷却，观察颜色变化及有无沉淀析出。样品：葡萄糖、果糖、蔗糖及麦芽糖样品葡萄糖果糖蔗糖麦芽糖现象砖红色沉淀砖红色沉淀无砖红色沉淀解释: 硫酸铜与碱溶液混合加热，生成黑色的氧化铜沉淀。若同时有还原糖存在，则产生黄色或砖红色的氧化亚铜沉淀。成脎试验（1）实验原理: 单糖与过量的苯肼作用生成糖脎，糖脎是不溶于水的黄色晶体。不同的糖脎，其晶形、熔点及生成速度大都不同，所以可通过成脎试验区别不同的还原性糖。由于成脎反应是发生在C1和C2上，不涉及糖分子的其他部分，所以葡萄塘、果糖都能生成相 同的脎。但由于成脎的速度不同，仍然是可以区别的。(2)操作方法 在试管中加人1 mL 5%的样品溶液，再加入0.5 mL 10%的苯肼盐酸盐溶液和0.5 mL 15%的乙酸钠溶液，在沸水浴中加热并振摇，记录并比较形成结晶所需要的时间。并在低倍显微镜下观察脎的结晶形状。样品:葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖注意: 苯肼有较高毒性。取用时慎勿触及皮肤。若已发生皮肤沾染，先用稀醋酸洗，再用清水洗净。样品葡萄糖果糖蔗糖麦芽糖现象21min出现黄色晶体10min出现黄色晶体无解释: 单糖与过量的苯肼作用生成糖脎，糖脎是不溶于水的黄色晶体。不同的糖脎，其晶形、熔点及生成速度大都不同，所以可通过成脎试验区别不同的还原性糖。（五）Tollens试验在洗净的试管中加入1 mL Tollens 试剂， 在加入0.5 mL 5%糖溶液，在5