无菌检查方法验证..docVIP

无菌检查方法验证： 取本品，分别加灭菌注射用水1ml溶解，采用薄膜过滤法依法检查（中国药典2010年版二部附录Ⅺ H），应符合规定。 菌液制备：10倍稀释法 菌种 培养基 菌悬液制备 枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501 营养琼脂培养基 用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌少于100cfu（菌落行程单位）的菌悬液 金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003 营养琼脂培养基 大肠埃希菌CMCC(B)44102 营养琼脂培养基 生孢梭菌CMCC(B)64941 硫乙醇酸盐培养基 白色念珠菌CMCC(F)98001 改良马丁培养基 黑曲霉菌CMCC(F)98003 改良马丁琼脂斜面培养基 加入5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，再同上制成每ml含菌小于100cfu的菌悬液 菌悬液制备计数结果 菌种 代数 稀释级 菌落数（cfu/ml） 枯草芽孢杆菌 4 10-6 61 金黄色葡萄球菌 4 10-7 89 大肠埃希菌 4 10-6 78 生孢梭菌 4 10-6 67 白色念珠菌 4 10-7 83 黑曲霉菌 4 10-4 40 1、供试品处理 将供试品去掉铝塑盖，外表面用75%酒精全面消毒，然后向每支样品中注入1.0ml0.1%的蛋白胨灭菌溶液，备用。 2、检查 阳性对照：将等量的试验菌直接加入到液体硫乙醇酸盐培养基或改良马丁液体培养基管中，在相应的温度下培养。液体硫乙醇酸盐培养基管在30-35℃下培养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5天。观察记录。 阴性对照：将灭菌的液体硫乙醇酸盐培养基或改良马丁液体培养基管直接放在相应的温度下培养。液体硫乙醇酸盐培养基管在30-35℃下培养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5天。观察记录。 样品（薄膜过滤法）：每种实验菌取10支处理好的供试品溶液，将溶液合并后加入制备好的菌悬液1ml，用0.1%的蛋白胨灭菌溶液稀释至100ml，按薄膜过滤法过滤，取出滤膜，将其分为3等份，分别置于含硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基的容器中，其中一份作为阳性对照用。其中：试验菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、生孢梭菌的滤膜接种至液体硫乙醇酸盐培养基管中；试验菌为白色念珠菌、黑曲霉菌的滤膜接种至改良马丁液体培养基管中。液体硫乙醇酸盐培养基管在30-35℃下培养；改良马丁液体培养基管在23-28℃下培养3-5天。观察记录。 试验结果 菌种 接种管 天数 1 2 3 4 5 枯草芽孢杆菌 1 - + 2 - + 金黄色葡萄球菌 1 - + 2 - + 大肠埃希菌 1 - + 2 - + 生孢梭菌 1 - + 2 - + 白色念珠菌 1 - - - + 2 - - - + 黑曲霉菌 1 - - - + 2 - - - + 阴性对照 硫乙醇酸盐培养基 - - - - - 改良马丁培养基 - - - - - 表中接种管数中1代表用薄膜过滤法接种管；2代表各试验菌不加供试品的阳性对照管。 3、实验结论：含供试品的培养管中微生物生长无微弱、缓慢或不生长，表明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用。 附：试生产三批注射用胸腺五肽（规格10mg）无菌检查原始记录 内毒素测定方法学研究： 取本品三批样品，加0.9%灭菌氯化钠溶液制成0.6mg/ml的溶液，各取适用的家兔3只，共9只，依法测定（中国药典2010年版二部附录Ⅺ D），剂量按家兔体重每1kg注射1ml。 热原检查试验结果 升温℃ 降温℃ 总升温℃ 总降温℃ 总升温℃ 总降温℃ 总升温℃ 总降温℃ 总升温℃ 总降温℃ 总升温℃ 总降温℃ 0.43 - 0.92 - 0.31 - 0.91 - 0.45 - 0.95 - 0.26 - 0.39 - 0.26 - 0.23 - 0.21 - 0.24 - 结论：三批供试样品热原检查均符合规定。细菌内毒素检查法是目前控制临床热原反应较为理想的方法之一，同时也是国际上认为较成熟的检测方法 Zhusheyong Xiongxian Wutai Thymopentin For Injection 本品为胸腺五肽与甘露醇等经冷冻、干燥的无菌制品，含胸腺五肽（C30H49N9O9）应为标示量的90.0%~110.0%。 【性状】 本品为白色冻干疏松块状物或粉末。 【鉴别】 （1）取本品，每支加水1ml溶解后，加双缩脲试剂（取硫酸铜0.15g，加酒石酸钾钠0.6g，加水50ml,搅拌下加入10%氢