实验三槐花米黄酮苷元的提纯和鉴定..docVIP

实验三 槐花米黄酮苷元的提纯和鉴定 槐米( Sophorae Flos) 为豆科植物槐树( Sopho japonica L )的干燥花及花蕾.夏季花开放或花蕾形成时采收，及时干燥，除去枝、梗及杂质，前者习称”槐花”后者习称“槐米”[1]。历来用作止血药物治疗痔疮、子宫出血、吐血、鼻血等症。 槐米用作药用已有2000 多年历史，槐米中的主要化学成分是芦丁（亦称芸香苷Rutin），含量可高达23.5%。具有不可多得的治病防病作用，目前主要用于治疗毛细血管的脆性和渗透性出血，降低人体血脂和胆固醇，是治疗高血压心血管疾病胃病皮肤病糖尿病等多种疾病的良药; 而且它还有抗菌和抗放射作用，可用于食品、化妆品的添加剂和着色剂； 芦丁也用于药物的中间体，合成羟乙基芦丁等药物，可治疗闭塞性脑血管疾病[2]。 Kite等[7]的研究显示，槐米中以槲皮素为苷元的黄酮化合物主要有4种，其中芦丁含量约占所有槲皮素苷的90%，(Rutin) 淡黄色针状结晶，熔点：含三分子结晶水物174~178℃，无水物为188℃。 溶解度： 溶剂溶解度% 水 MeOH EtOH 吡啶 冷 0.0013 1.0 0.36 8.5 热 0.55 11.2 3.5 易溶 不溶于乙醚、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等溶剂。易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸呈棕黄色。加水稀释后又析出。 2.槲皮素（quercetin） 为黄色结晶。熔点：含2分子结晶水物313℃~314℃，无水物316℃。 溶解度：乙醇：1：2901：23 4.超声提取法:通过液体介质引起的空化作用可造成植物细胞壁的瞬间破裂,便于提取溶剂渗透到植物细胞中,从而加速药材中有效成分的溶出,并且超声波提取不会改变有效成分的结构,同时减少溶媒用量、提高了提取效率，因而成为一种植物有效成分提取的新方法。 魏彩霞等[3]在提取功率、超声提取时间、提取次数、料液比等单因素考察试验的基础上，通过正交设计进行三因素三水平试验。最佳超声辅助提取工艺条件为: 超声频率 20kHz，提取功率 800W，提取温度 60℃，料液比 1∶20，超声提取 2 次，每次 30min; 芦丁提取率为 18. 25%，该提取工艺条件简单可行、速度快，可提高槐米中芦丁的产率。 5.黄酮苷可通过酸水解，得到苷元及糖，并可通过TCL、PC0g、蒸馏水、石灰乳、浓盐水、MeOH、100ml 1%H2SO4、300mln-BuOH-HAc-H2O(4:1:5)上层液、苯胺-邻苯二甲酸盐试剂、芦丁对照品、槲皮素对照品、80%乙醇、浓氨水、1% AlCl3醇溶液、10% α-萘酚乙醇液、浓硫酸、镁粉、三氯化铁醇溶液、1%AlCl3乙醇溶液、1%醋酸镁甲醇溶液、2%ZrOCl2甲醇溶液、2%柠檬酸甲醇溶液，5%亚硝酸钠，10%硝酸铝，4.3%氢氧化钠。 仪器：电子天平、研钵、500ml烧杯、100ml及10ml量筒、玻璃棒、pH试纸、超声清洗器、沸石、橡胶软管、水浴锅、抽滤漏斗、抽滤瓶、（红外灯）、250ml及500ml圆底烧瓶、球形冷凝管、电陶炉、旋转蒸发仪、分液漏斗、滤纸条、聚酰胺薄层板、展开槽、毛细管、紫外灯、小锥形瓶（或小试管）若干、紫外分光光度计。 五．实验流程： 六、实验方法 1.芦丁的提取 称取槐花米50g，研碎后置于1000ml的烧杯中，加热至70℃，加石灰乳调节pH10~11，加入硼砂1g[4]，浸润20min，然后超声提取30min（保持pH不变）,二次（第一次加水500ml，第二次加水450ml），合并滤液，在60~70℃下，用浓盐酸酸化至pH4~5，静置1h，减压过滤，取沉淀即得芦丁粗品。 2.芦丁的精制 上述沉淀称重后（湿品）加入25~30倍量的热水溶解，加热煮沸15min，趁热过滤，弃去不溶物，静置，放冷析出结晶、过滤，结晶自然干燥（或在红外灯下干燥、60~70℃），得芦丁水精制品。 再取1g芦丁水精制品用MeOH重结晶（1:10~15） 3.芦丁的水解 称取芦丁水精制液1g，置250ml圆底烧瓶中加1%H2SO4100ml直火回流30min（注意观察现象）放冷过滤（滤液留作糖的检识）。沉淀物为芦丁苷元——槲皮素的粗品。用甲醇重结晶（槲皮素粗品水洗至中性，加250ml加甲醇，加热，放冷静置，抽滤得晶体）。干燥称重，得槲皮素精品。 4.糖的检识 取芦丁水解后的滤液20ml。加Ba(OH)2溶液（或固体BaCO3）中和至中性，不断搅拌下进行。滤去白色的BaSO4沉淀。滤液浓缩至2~3ml作纸色谱的样品溶液。 条件： 对照品：鼠李糖、葡萄糖 展开剂：n-BuOH-HAc-H2O(4:1:5)上层液 显色剂：苯胺-邻苯二甲酸盐试剂，喷后在105℃加热5-10min。 5.芦丁及