CH50测定分析.pptVIP

血清总补体溶血活性测定 概述 补体是存在于血清中的一组不耐热的具有酶活性的球蛋白。 补体是抗体发挥溶细胞或溶菌作用的补充条件。 在正常情况下，补体含量相对稳定，但在某些疾病时可发生变化。 动态监测血清总补体的活性，对一些疾病有辅助诊断的意义。 实验原理 绵羊红细胞（ SRBC）与相应抗体结合形成的致敏红细胞可激活补体，从而导致SRBC溶解。 当致敏红细胞的浓度一定时，在规定的反应时间内，溶血程度与补体的活性成正相关，但不是直线关系，为典型的S形曲线。 在轻微溶血和接近完全溶血时，补体量的变化不能使溶血程度有显著改变，即溶血对补体量的变化不敏感。 在半溶血（50％溶血）上下时曲线最陡，即使补体含量仅有较小变动时，溶血程度也会发生较大的改变，也就是说对补体量的变化非常敏感。 故采用50％溶血作为终点指标要比100％溶血敏感的多，这一方法称为补体50％溶血试验（complement hemolysis 50％ assay），简称为CH50。 以引起50%溶血所需的最小补体量为一个CH50单位，由此可以计算出待测血清中总的补体溶血活性，以U/ml表示。 主要试剂与器材 溶血素 2％SRBC pH7.4 巴比妥缓冲液（BBS） 待测血清、蒸馏水 离心机、试管、吸管、恒温水浴箱、分光光度计、比色杯等 实验步骤 1.稀释待测血清：吸取待测血清0.2ml，加BBS3.8ml，将血清1：20稀释（已完成）。 2.正式实验 取10只试管，分别编号，按照下表加入各试剂 3.制备50％溶血标准管 理论方法 代替方法 2％SRBC 0.5ml 4.5ml H2O + + 蒸馏水2ml 2 ％SRBC 0.5ml + 17g/L高渗盐水 2ml + 2 ％SRBC 0.5ml 以上两种方法效果相同，所以实验中采用后者。 结果判断方法 将各反应管经2500r/min、5min离心后，先用目测法观察其溶血程度，并与50％溶血标准管比较，选择与标准管最接近的两管。 再用分光光度计于波长542nm进行比色测定。以BBS缓冲液为空白对照，校正零点，找出吸光度与标准管最接近的一管，根据该管的血清用量，求出总补体溶血活性。 实验结果 写出标准管和选出的两管的吸光度，判断哪一管与标准管的透光率接近。 计算总补体活性。 注意事项 待测血清必须新鲜，如放置室温2h以上，可使补体活性下降。 待测血清还应该无溶血、无污染等。 绵羊红细胞等试剂均应新鲜配制。 实验器材应该清洁，残留的酸碱等化学物质均可使补体受破坏。 补体的溶血活性可受多种因素的影响，如溶液的酸碱度变化、钙和镁离子增加等可使补体溶血活性降低。 应用与评价 本方法快速、简便，但敏感性较低，结果易受多种因素的影响。 主要用于测定补体经典激活途径的溶血功能，不能测定补体蛋白的绝对值 参考值：50-100U/ml 增高：可见于急性炎症、组织损伤、恶性肿瘤 降低：多见于免疫复合物型超敏反应 * * 试管号 BBS 1：20稀释血清 2％SRBC 2U溶血素 补体溶血活性 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1.40 1.35 1.30 1.25 1.20 1.15 1.10 1.05 1.00 1.50 0.10 0.15 0.20 0.25 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.00 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 置 37℃ 水浴 30min 200 133 100 80 66.6 57.1 50 44.4 40 - 使红细胞全部溶血 形成等滲 50％溶血管 总补体活性（U/ml） ＝ 1 血清用量（ml） ×稀释倍数