8胚胎移植-细胞工程例析.ppt

* * （2）．采卵方法 有手术法和非手术法两种。在大家畜基本上已将手术法淘汰，但在绵羊、山羊、猪和实验动物由于受解剖特点的限制，一直采用手术方法。不管用何种方法，一般收集卵子数只能相当于黄体数的40～80％。 * 第一种由宫管结合部冲向输卵管。本法冲卵率高，很少损害生殖道。除了猪因宫管结合部具有阀门样结构不能采用以外，各种中、小动物均可采用。 第二种方法是由输卵管伞冲向宫管结合部。本法适用于猪，是由一个插入该处的钝注射针头或光滑的细玻管收集卵子；其缺点是术后常造成宫角尖端或输卵管粘连。 * 第三种方法是由子宫角尖端冲向子宫角基部。本法用于发情5天以后收集子宫内的卵，其收集数量比A, B法略少，易引起子宫粘连。 冲卵液为杜氏PBS,用量:第一、第二两种方法用5-l0ml，第三种方法用10-20ml。 * * 羊的手术法采卵 * 羊的手术法采卵 * 手术操作现场 * Sμgie创造了一种带有气球的非手术采卵器，可由牛的子宫角采卵，显著提高了采卵率。Folley和Stewart又相继改进，设计出三通路（进气、进液、回液）导管采卵器（附图4），使用更加方便有效，能够从同一供体反复收集卵子。 冲卵液的用量一般为500 ml，装入输液瓶内，每次放出30-60m1，反复冲洗子宫角，并回收到集卵杯内。冲完一个子宫角后，再用同法冲洗另一子宫角。 * * * 5.检卵（Egg picking） 将冲卵液回收之后，尽快置于放大10-15倍的实体显微镜下，检查收集到的卵数，并用一细吸管将卵移至新鲜培养液内，在放大40-200倍的复式显微镜下，进行形态学观察，选出适合于移植的正常卵（附图5）。形态不正常者（附图6）及发育延迟2天以上的卵，都不可用于移植。 * 检胚 * 显微镜下的胚胎 * * * 6.移植胚胎（Egg transplantation） 移植胚胎就是将采取的可用卵移给受体母畜，亦称卵的移植，简称移卵。 移卵方法：与采卵方法相似，也分为手术法与非手术法两种，前者适用于不能进行直肠操作的中小动物，后者适用于大家畜。 * 手术法移卵 方法与采卵一样，先暴露输卵管及子宫角，再将卵注入输卵管或子宫角。当移入输卵管时，将毛细移卵管的尖端通过输卵管伞插到壶腹部，注入含有胚胎的培养液1～2滴；若移入子宫角，可先用钝针头刺破子宫角壁，然后将毛细管从针孔插入子宫腔，注入含胚胎的培养液 * * * 羊的手术法移卵 * * 非手术法移卵 自从1982年以来，非手术法已被某些胚移中心用于商业性移植，但将胚胎送到子宫角内需要有一定经验。为了提高成功率，Elsden（1982）将其总结为四步。 ①将胚胎吸入0.25ml细管中，位于两个气泡之间。 ②将细管装入卡苏枪，枪外由一塑料套保护。 ③将受体保定好，进行硬膜外麻醉，由直肠触摸黄体位于何侧。 ④将胚胎送到黄体同侧的子宫角中部。 * * * * 第六章 胚胎移植 * 胚 胎 移 植 胚胎移植（embryo transfer,ET）也称受精卵移植，是指将一头良种母畜配种后的早期胚胎取出，或者由体外受精及其他方式获得的胚胎，移植到另一头同种的生理状态相同的母畜体内，继续发育成为新个体，所以又称之为人工授胎或借腹怀胎。 提供胚胎的个体称为------供体（donor） 接受胚胎的个体称为------受体（recipient） * 胚 胎 移 植 的 意 义 1.发挥优良母畜的繁殖潜力，提高繁殖效率。 2.促进家畜改良的速度 3.产生双胎和使不孕母畜获得生殖能力 4.濒危动物的拯救和保护 5.研究手段 * 胚 胎 移 植 的 原 则 1.受体与供体在分类学上的相同属性 2.动物生理上的一致性 3.动物解剖部位的一致性 4.胚胎发育的期限 5.胚胎的质量 6.供体、受体的状况 * 胚胎移植原则图解 * 胚 胎 移 植 的 程 序 优良种公畜 供体（优良母畜） 超 数 排 卵 处 理 发 情、配 种 胚 胎 回 收 超 数 排 卵 处 理 受体（优良母畜） 同 期 发 情 处 理 发 情 胚 胎 移 植 优 良 后 代 * 胚胎移植图解 * 雄性生殖内分泌调控 * 雌性生殖内分泌调控1 * 雌性生殖内分泌调控2 * 在生理或非妊娠条件下，雌性动物每间隔一定时期均会出现一次发情，通常将这次发情开始至下次发情开始、或这次发情结束至下次发情结束所间隔的时期，称为发情周期。 发 情 周 期 * 通常根据动物的精神状态、雌性动物对雄性动物产生的性欲表现、卵巢内卵泡的生长发育、排卵和黄体形成的情况及雌性生殖道（子宫、阴道等）的生理变化等几个主要方面，将发情周期划分为： 发情前期（前情期） 发情期 发情后期（后情期