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离子交换层析在各方面的应用 离子交换层析（Ion Exchange Chromatography简称为IEC）是以离子交换剂为固定相，依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。离子交换层析技术已广泛用于各学科领域。在生物化学及临床生化检验中主要用于分离氨基酸、多肽及蛋白质，也可用于分离核酸、核苷酸及其它带电荷的生物分子。DEAE高子交换层析法对卵黄免疫球蛋白(IgY)进行分高纯化，经DEAE离子交换层析得到高纯度的IgY。【4】2010年马江涛、陈昕等人使用Bio—Rad的DiaSTAT糖化血红蛋白检测系统(LPLC)和Biosystem.S.A的微柱离子交换层析法分别测定糖化血红蛋白，并进行精密度、网收率、干扰闪素及相关性的比较分析,证明了离子交换层析法测定糖化血红蛋白的方法适合临床常规应用。【5】2010年蒋超，张或等人用超滤、阳离子交换层析方法从热钙法处理过的干酪乳清中分离纯化乳铁蛋白，其纯度达93.6%。近年来，随着合成技术的发展和生产的需要，人工合成的刚性材料被陆续开发出来，这也是未来离子交换介质发展的一个趋势。 1. 层析分离纯化家兔血清PONl条件的优化 代恒、赵敏等人报道，Paraoxonase(PONl)是--个钙离子依赖的酯酶，它可以水解包括有机磷类，芳香酯类在内的多种化合物。作为一种生物酶，PONl可以在普通的生物环境下将有机磷类毒剂迅速水解，使之分解为无毒或低毒的化合物。存在于血清中的PONl，可达到在有机磷毒物到达它的生物受体之前将其清除的目的。在本研究中，使用Cibacron Blue F3GA琼脂糖的假亲和层析得到初步分离富含PONl的Cibacron流分，选定DEAE Sepharose Fast Flow为离子交换层析介质，通过AKTA purifier全自动层析仪，在PH值分别为7．0，7．5，8．0，8．5，9．0，9．5条件下对Cibacron流分进行离子交换层析。通过结合AKTA purifier记录的层析图谱，含PONl活性成分的SDS凝胶电泳分析层析结果及PONl酶活性监测，综合分析得到优化的PH值。结果显示：AKTA purifier记录的层析图谱显示，以DEAE Sepharose Fast Flow为介质的阴离子交换层析，在分离含有PONl的Cibacron Blue流分中，较高的PH值有利于蛋白质的分离。随PH值增加，PONl与杂质蛋白质逐渐分离，PONl浓度相对蓄积，PH值为9．0及9．5条件下没有额外杂质蛋白质由PONl活性峰分离。PH值为9．O和9．5条件下得到高纯度的PONl，达到经典方案中的纯化效果。 2、超滤／DEAE离子交换层析法分离纯化IgY IgY是一种7S免疫球蛋白，分子量l 80 kDa，由两条重链(分子最67~70 kDa)和两条轻链(分子量22~ 30 kDa)组成，等电点接近5．2。已经证明特异性IgY对人及动物的许多疾病具有一定的预防和治疗作用，与其他用于被动治疗的免疫球蛋白相比，IgY具有价廉易得、稳定性好、可口服等优点，在疾病的免疫检测和防治方面具有良好的应用前景。方希修、王冬梅报道，应用平板式膜超滤技术与DEAE高子交换层析法对卵黄免疫球蛋白(IgY)进行分高纯化。首先，卵黄液经过缓冲液稀释分离；然后，用平板式膜组件对其超滤，并且分析了各种因素对其的影响，确定分子截留量为l00kDa，操作压力差为0．12MPa、进料温度为30oC。pH5.2，截留液抗体回收率达到91.89％，纯度为86％：最后，经DEAE高子交换层析得到高纯度的IgY。 3、离子交换层析法测定糖化血红蛋白 马江涛、陈昕等人使用Bio—Rad的DiaSTAT糖化血红蛋白检测系统(LPLC)和Biosystem.S.A的微柱离子交换层析法分别测定糖化血红蛋白，并进行精密度、网收率、干扰闪素及相关性的比较分析,证明了离子交换层析法测定糖化血红蛋白的方法适合临床常规应用。【5】同时2011年，梅方超、吴琴等人用离子交换高效液相色谱（HPLC）法.微粒色谱法测定糖化血红蛋白(HbAlc)并对实验结果进行比较.偏倚分析、离群点检验、线性回归分析、预期偏倚计算。两种方法结果相对偏差仅为-3.1%。线性回归方程Y=1.0232X-0.2502.糖化血红蛋白的可接受偏倚在预期偏倚可信区间之内，因此微粒色谱法与HPLC法结果具有可比性，微粒色谱法可作为常规方法用于临床。【8】2010年，李笑平，曹永坚等人报道，为比较免疫抑制比浊法和离子交换层析法测定糖化血红蛋白(HbAlc)的差异，使用两种方法同时检测51份常规样品，进行相关性的比较，结果采用相对偏差，t检验及回归方程进行了统计分析，结果表明免疫抑制比浊法和离子交换层析法测定