基因工程实验教案分析.docVIP

实验报告 实验项目名称：基因工程综合实验 所属课程名称：基因工程原理 班 级：12生物工程3班 学 号：201230620312 姓 名：李杰锋 指 导 老 师 ：徐学锋 目 录 摘要..........................................................1 前言..........................................................1 实验材料和仪器................................................2 2.1 实验材料 .................................................2 2.2 实验仪器 .................................................2 实验试剂......................................................2 3.1 DNA提取所需试剂........................................2 3.2 PCR实验所需试剂 .......................................2 3.3 双酶切实验所需试剂.......................................2 实验步骤......................................................3 4.1 质粒DNA提取.............................................3 4.2 聚合酶链式反应（PCR）....................................3 4.3 质粒DNA的双酶切分析 ....................................4 4.4 琼脂糖凝胶制备............................................4 实验结果与分析.................................................5 5.1质粒DNA提取所得凝胶电泳结果..............................5 5.2 PCR扩增实验结果...........................................5 5.3质粒DNA的双酶切分析结果..................................6 摘 要：本实验包括质粒DNA的提取、DNA的凝胶电泳、质粒DNA中靶基因的酶切分析及质粒DNA中重组进的靶DNA序列的PCR扩增。通过本综合实验，进一步理解质粒DNA的提取原理、凝胶电泳中DNA分离的机理、限制性内切酶的工作原理及PCR是如何实现DNA扩增的，也掌握了DNA的提取技术、凝胶电泳技术、DNA酶切分析技术及靶基因的体外快速扩增技术，进而了解实验中出现的现象并学会分析与解决实验中出现的有关问题。 聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction，简称PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火（复性）及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。不仅可用于基因分离、克隆和核酸序列分析等基础研究，还可用于疾病的诊断或任何有DNARNA的地方 关 键 词：凝胶电泳 限制线内切酶 DNA质粒 1 前言 本次实验对象为含有重组了1kb DNA片段的PET32.a表达质粒。该表达质粒中长度约6kb。首先采用离心破碎法破碎细胞，再使用碱裂解法提取质粒DNA。最后通过各种化学抽提纯化质粒DNA，最后得到纯化后的DNA质粒作为之后实验的材料。在碱性溶液中，双链DNA氢键断裂，DNA双螺旋结构遭破坏而发生变性，但由于质粒DNA分子量相对较小，且呈环状超螺旋结构，即使在高碱性pH条件下，两条互补链也不会充分分离，当加入中和缓冲液时，变性质粒DNA又