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有氧训练对大鼠腓肠肌ChREBP及其调节因子的影响 　　摘要：目的：探讨有氧训练对大鼠骨骼肌ChREBP及其调节因子PP2A、PKA、AMPK和MLx的影响。方法：20只适应训练后8周龄SD大鼠随机分为安静组和运动组，每组10只。运动组进行35 m/min、1 h /d、5d/周跑台训练、共训练4周。RQ-PCR和WB检测PP2A、PKA、AMPK、MLx和ChREBP的基因和蛋白表达。结果：经过4周有氧训练后，运动组大鼠腓肠肌PP2A、AMPK mRNA表达和AMPK、MLx蛋白表达水平显著高于安静组（P005）。结论：有氧训练通过降低CHREBP蛋白表达和通过PP2A、PKA、AMPK途径降低CHREBP活性抑制ChREBP功能，可能是有氧训练降低体脂的机制之一。 　　关键词：有氧训练；ChREBP；PP2A；AMPK；PKA；MLx 　　中图分类号：G804.7文献标识码：A文章编号：1006-2076（2013）05-0036-04 　　糖类应答元件结合蛋白（carbohydrate response element binding protein，ChREBP）是2001年发现的一种能与糖类应答元件（carbohydrate response element，ChRE）结合的蛋白质，在哺乳动物的各种组织器官中分布广泛，而以肝脏、脂肪、小肠、肾脏和肌肉等组织中含量较多[1]。有研究显示，肝脏中有139个基因受 ChREBP 的调节，包括与糖代谢有关的丙酮酸激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶等，与脂肪酸合成有关的脂肪酸合酶、乙酰辅酶A羧化酶等，与甘油三酯合成有关的线粒体甘油三酯转移蛋白、三磷酸甘油脱氢酶等[2]。目前大量的研究表明，ChREBP是独立于胰岛素之外的调控糖脂代谢的重要转录因子，在机体能量代谢中起到非常重要的转录调节作用。有氧训练是目前治疗肥胖及其相关的糖尿病、脂肪肝等病症的有效手段，涉及的研究目前多与胰岛素有关，而ChREBP在其中的影响及相关机制却鲜有报道。本研究通过观察有氧训练对大鼠骨骼肌中ChREBP及其调节因子蛋白磷酸酶2A （protein phosphatase 2A，PP2A）、蛋白激酶A （protein kinase A，PKA）、AMP活化蛋白激酶（AMP activated protein kinase，AMPK）和Max 样蛋白 X（Max like protein x，MLx）基因和蛋白表达的影响，为有氧训练改善机体糖脂代谢的机制研究提供新的实验依据。 　　1材料与方法 　　1.1动物与分组 　　6周龄雄性SD大鼠30只，购自广东省医学实验动物中心，实验动物生产许可证号：SCXK（粤）2009-0002，体重160～180 g，分笼饲养，每笼5只，自由饮食，室温23℃～25℃，湿度40%～60%，自然光照，自由饮食。定期消毒饲养室、用具等。所有大鼠在常氧条件下先进行2周跑台适应性训练，每天运动15 min，速度从12 m/min开始，逐天增加，2周后达到35 m/min。动物跑台为杭州段氏大鼠跑台。两周后根据大鼠体重和训练情况进行正态分布分组，淘汰体重过重和过轻、运动能力较差及有伤病的大鼠，保留20只进行正式实验。20只大鼠随机分为安静组和运动组，每组10只。本实验在广州体育学院运动生物化学重点实验室进行。 　　1.2训练方案 　　训练组进行常氧环境下的跑台训练，35 m/min、1 h /d、5 d/周[3]。安静组正常生活，不接受跑台训练，正式实验时间为4周。 　　1.3标品采集 　　第4周末，运动组完成最后训练24 h后取材，安静组同一时间取材。按0.3 ml/100g体重剂量腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠，腹主动脉取血，迅速分离腓肠肌，以灭菌锡纸包好在液氮中快速冷冻后保存于-80℃超低温冰箱中。 　　1.4测试方法 　　1.4.1RQ-PCR测定 PP2A、MLx和ChREBP基因表达 　　总RNA提取：以Trizol Reagent （Invitrogen，USA）提取腓肠肌总 RNA，经紫外分光光度仪测定其OD260/OD280在1.6～1.8之间，提示提取的RNA符合纯度要求，可用于后续PCR。 　　反转录合成模板cDNA：0.5ml去酶管中加入总RNA 2 μg、25×Oligo dT 1 μl 、 加DEPC-去离子水至 13 μl ；850C 变性5 min，然后冰上放置2 min以上；加入逆转录5×反应缓冲液5 μl，25mM dNTP 1 μl 、25 U/μl RNase Inhibitor 1 μl、M-MLV RTase（RNase H free）（GeneCopoeia，USA）1 μl、ddH2O（RNase/DNa