乌鸡家鸡血清测定-结题报告.pptxVIP

血清成分分析 陈佳丽 潘茜茜 林艳青 指导老师：张旭老师 2012-12-29目录 1血清胆固醇的测定 2血清清蛋白γ-球蛋白的分离与鉴定 3谷丙转氨酶活性的鉴定及活力单位的测定 /dx //dx/150603/4633906.html/dx/150603/4633913.html/dx/150603/4633923.html/dx/150604/4634454.html/dx/150604/4634455.html/dx/150605/4635227.html/dx/150605/4635284.html/dx/150606/4635592.html/dx/150606/4635595.html/dx/150607/4635682.html/dx/150608/4636149.html/dx/150608/4636153.html/dx/150609/4636872.html/dx/150609/4636884.html/dx/150610/4637558.html/dx/150610/4637564.html/dx/150527/4630634.html/dx/150527/4630628.html/dx/150527/4630610.html/dx/150527/4630609.html实验原理胆固醇及其酯在硫酸存在下和邻二甲醛作用。产生紫红色物质，此物质对550nm波长的光有最大吸收，可用比色法定量测定。100ml样品中胆固醇含量在400mg以内与光吸度呈良好线性关系。实验材料血清：一管为家鸡血清，一管为乌骨鸡血清 邻苯二甲醛试剂，90%醋酸，混合酸，标准胆固醇贮液（1mg/mL），标准胆固醇应用液（0.1mg/mL） 实验步骤1 取清洁干燥试管5支，编号，按表格加入试剂。2 加毕，混匀，静置10min，以550nm波长比色测定，以吸光度值为纵坐标，胆固醇含量为横坐标，做标准曲线。本 1 取3支清洁干燥试管，编号后，按表格加入试剂。2 加毕，混匀，静置10min，于550nm波长比色，以对照管校零点，对照标准曲线即知100mL样品中总胆固醇含量（mg）。本绘制表格记录标准曲线及样品各试剂吸光值。绘制标准曲线，在曲线上描出与样品吸光值对应的胆固醇含量。实验结果对照标准曲线可得：家鸡血清550nm处的光波吸收值为 0.130 。100ml家鸡血清中胆固醇的含量为75mg。根据参考资料鸡的血清胆固醇的含量在51-196mg/100ml之间是在可信范围内[1]。所以本实验测得家鸡血清胆固醇含量75mg/100ml是在可信范围内。实验分析1.硫酸颜色的高低对显色有影响，所以混合酸的配制和测定过程中的加量都应准确。2.显色要避免高温（采用混合酸液反应时温度不会升得太高，一般在4到32摄氏度时，颜色能稳定2h）。3.做标准曲线时试管一定要洁净干燥，因为本身所加的蒸馏水只有0.01ml.。4.用微量进样器时一定要看清刻度。5.实验中注意混匀时不要摇晃至产生气泡，防止影响实验结果。6.实验中注意勿让混合酸腐化分光光度计。 返回目录 1血清清蛋白与γ-球蛋白的盐析蛋白质透析与浓缩 2凝胶层析的实验 3 4醋酸纤维素薄膜电泳实验原理血清清蛋白与γ-球蛋白的盐析 血清中含有清蛋白和各种球蛋白（α-β-γ-球蛋白等），由于它们所带电荷不同、相对分子质量不同，在高浓度盐溶液中的溶解度不同，因此可利用它们在中性盐溶液中溶解度的差异而进行沉淀分离，此法称为盐析法。实验材料血清：一管为家鸡血清，一管为乌骨鸡血清 PBS （NH4）2SO4溶液 双缩脲试剂 酪蛋白 蔗糖BaCl2溶液 实验步骤血清清蛋白与γ-球蛋白的盐析 返回实验原理蛋白质透析与浓缩 1.透析是利用蛋白质等生物大分子不能通过半透膜的性质的一类纯化方法,可利用该方法分离大分子和小分子混合物.2.由于NH4+和SO4 2+可以通过半透膜，二血清清蛋白不能，因此，可以利用透析的方法是清蛋白溶液脱盐。3.将盛有待浓缩饿 大分子溶液的透析袋放入高浓度的吸水性强的蔗糖固体颗粒中，袋内溶液中的水杯 袋外的 多聚物所吸收而有效地浓缩。实验材料透析袋、蔗糖固体颗粒 实验步骤蛋白质透析与浓缩的实验步骤 返回 1. 取玻璃纸（15cm×15cm）两张，折成袋状。将前面第一次盐析得到的含有清蛋白的上清液和γ-球蛋白分别倒入两个透析袋中，用线绳系紧上口。 2. 用玻璃棒悬挂在盛有半杯蒸馏水的100mL烧杯中，使透析袋下半部浸入水中，流水透析1h。。3. 将两透析袋取出，埋入蔗糖中浓缩实验步骤凝胶层析的实验步骤实验结果凝胶层析蓝葡聚糖重铬酸钾实验结果洗脱曲线实验分析 返回1.凝胶层析中观察到试管中的层析液中葡蓝聚糖颜色由浅变深再变浅，重铬酸钾的层析液的颜色变化也是呈这种规律。2.凝胶在实验前的