第六章 -体外标记免疫分析【参考】.pptVIP

灵敏度 测定方法的最小检测量 影响因素：抗体亲和力和特异性、标记品的比活度 抗原的免疫原性以及反应方式和温育条件等。 确定方法：零标准管法、t值检验法、粗略估计法。 特异性 决定于抗体对被测物质的专一性 常用交叉反应来表示 稳定性 指实验批间的重复性 常用最大结合率（B0%） 　非特异性结合率（NSB%） 　标准曲线直线回归参数（a、b、r） 　标准曲线结合率（ED）等指标评价 质量控制评价系统 实验室内部质量控制(IQC) 实验室室间质量控制(EQC) 包括从采集标本、收集、转运标本到发出报告的全过程中，能及时发现检测过程中出现的各种误差，分析产生原因，找出解决办法，以确保检测质量。 检测、控制检测方法的精密度，并检测其准确度的改变，提高常规测定工作的批间、批内检测结果的一致性。 实验室内部质量控制(IQC) 实验室间质量控制(EQC) 由第三方机构（质量控制中心）组织实施 提高各实验室之间检测结果的可比性 由一个单位提供方案及外部质量平价用的统一样品，分发到各参加单位进行检测，然后将所得结果反馈于负责单位进行整理分析、评价，用以促进检测质量的提高和资料的可比性。 实验室间质量控制(EQC) 　　　　　　　　 发展 RIA 标记抗原(*Ag)和非标记原(Ag)与限量抗体(Ab)竟争结合。 分类 微孔滤膜法 盐析法 活性炭吸附法 磁化颗粒法 双抗体法 固相分离法 分离方法 第三节 体外标记免疫分析的类型 体外标记免疫分析的类型 体外标记免疫分析 放射性核素标记 免疫分析 (RIA、 IRMA) 酶标记 免疫分析 发光标记 免疫分析 (化学发光标记免疫分析 化学发光酶免疫分析 电化学发光免疫分析) 时间分辩荧光 免疫分析 放射性核素标记免疫分析 概念： 　　　一种将放射性核素测量的高灵敏性、高精确性和抗原抗体反应的高特异性相结合的体外测定超微量（10-9～10-15g）物质的新技术。 放射性核素标记免疫分析 分类: 竞争性(标记抗原,抗体限量) RIA 非竞争性(标记抗体,抗体过量) IRMA 放 射 性 核 素 标 记 放射性核素标记免疫分析 　 优缺点： 　　　自1959年Yalow和Berson创建的放射免疫分析（RIA）具有灵敏度高、特异性强、简便实用、成本低廉等优点。为生物医学的微量物质分析开创了新的领域。发展到目前为止由此衍生出了各种各样的标记免疫分析技术。 　　　虽然RIA仍有较广泛的使用市场和价值，但其方法学上固有的弱点使发展受到一定限制。如必须使用放射性同位素作为标记物，存在人为的因素影响较大、辐射防护及防止污染的问题，试剂盒使用时间短，可测量范围相对较窄，难以实现操作及测量的自动化等。 酶标记免疫分析（EIA） 概念： 　　　是应用酶标记抗体（抗原）与抗原（抗体）产生特异性反应，根据酶对底物的显色反应而定量分析待测抗原或抗体含量。 分类: 均相EIA：酶增强免疫分析（EMIT） 非均相EIA:酶联免疫吸附分析法（ELASA） 时间分辨荧光免疫分析(TrFIA) 概念： 　　　 是应用镧系元素标记抗原或抗体，利用紫外线或激光使其发射荧光，结合波长和时间两种分辨技术的微量分析方法。 常用镧系元素： 　　铕、铽、钐、镝 特点： 分析范围宽 灵敏度高 专一度高 稳定性强 1 2 3 4 发光标记免疫分析 化学发光标记免疫分析 （CLIA） 电化学发光免疫分析(ECLIA) 化学发光酶免疫分析(CLEIA) 分类 化学发光标记免疫分析 （CLIA） 化学发光免疫技术：化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光的强度来确定物质含量的分析方法。化学发光免疫分析是将化学发光系统与免疫反应相结合，用化学发光相关的物质标记抗体或抗原，与待测的抗原或抗体反应后，经过分离游离态的化学发光标记物，加入化学发光系统的其它相关物产生化学发光，进行抗原或抗体的定量或定性检测。 发光 Y Y Y 磁微粒 被测抗原 + 抗体 + 带吖啶酯标记物抗体 Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y Y 冲洗后 --- 夹心法 （1） 加入H2O2 （pH10） （2） 加入碱 （pH10） 化学发光标记免疫分析 （CLIA） 概念： 　　　利用化学反应中释放大量自由能产生激发态中间体，当其退激到基态时，发射出光子，对这些光子量进行测量从而进行定量分析抗原含量。 常用发光剂： 　　鲁米诺类、吖啶酯类 特点： 灵敏度高 特异性强 重复性好 测定范围宽 1 2 3 4 化学发光酶免疫分析(CLEIA) 是将高特异性的酶标记免疫分析技术和具有高灵敏度的化学发光分析技术相结合的一种标记免疫分析方法。 发光剂：金刚烷 特　点： 标记结合稳定 发光持续时