第八章 生物样品内中药制剂化学成分的测定【参考】.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 体内药物分析 * 第三章 生物样品与样品制备 第二节 生物样品的预处理 反相离子对提取法应用 皮质酮葡醛酸缀合物的离子对提取 因含有羧基药物呈阴离子状态存在 反离子——四戊基铵 有机相——氯仿 * 体内药物分析 * 2. 固相萃取法 （Solid-phase extraction, SPE） 原理 将不同填料作为固定相装入微型小柱，当含有药物的生物样品溶液通过时，由于受到吸附、分配、离子交换或其它亲和力作用，药物或杂质被保留在固定相上，用适当溶剂清洗杂质，再用适当溶剂洗脱药物。 第三章 生物样品与样品制备 第二节 生物样品的预处理 返回 (三)样品的分离与纯化 * 体内药物分析 * * 体内药物分析 * 常用洗脱方式 ① 药物与固定相的亲和力比杂质强 而被保留，用一种对药物亲和力更 强的溶剂洗脱 ② 杂质与固定相的亲和力比药物强 药物被直接洗脱 第三章 生物样品与样品制备 第二节 生物样品的预处理 返回 (三)样品的分离与纯化 固相萃取法 * 体内药物分析 * 固相萃取法 固相的选择原则 固相与被测组分应具有相似的极性 ① 亲脂型（大孔吸附树脂、亲脂性键 合相硅胶） ② 亲水型（硅胶、硅藻土、棉纤维） ③ 离子交换型 第三章 生物样品与样品制备 第二节 生物样品的预处理 * 体内药物分析 * 固相萃取法 实验步骤 第一步：用甲醇润湿小柱，活化填料 第二步：用水或适当的缓冲液冲洗小柱 —除去残留的甲醇 第三步：加样，使样品经过小柱，弃去废液 第四步：用水或适当的缓冲液冲洗小柱， 去除内源性杂质 第五步：选择适当的洗脱溶剂洗脱被分析物， 收集洗脱液，挥干溶剂，备用或直接 进行在线分析 第三章 生物样品与样品制备 第二节 生物样品的预处理 * 体内药物分析 * 固相萃取法 注意： 1.血浆样品可直接上柱 2.样品量0.1~2ml 3. 流速1~2ml/min 第三章 生物样品与样品制备 第二节 生物样品的预处理 * 体内药物分析 * 固相萃取法 方法特点 优点 ① 引入杂质少 ② 完全避免乳化的形成 ③ 在优化条件下有较高萃取率、重现性较好 ④ 使用的溶剂大多可与水混溶，易于自动化 第三章 生物样品与样品制备 第二节 生物样品的预处理 缺点 ① 价格昂贵 ② 技术要求高 ③ 批-批之间有差异 * 体内药物分析 * 固相萃取法各种方法的比较 第三章 生物样品与样品制备 第二节 生物样品的预处理 固体萃取剂 萃取机理 被萃取物 回收 率 选择性 方便、 省时性 亲 脂 型 亲脂 性键 合相 硅胶 憎水吸附 较亲 脂或 具有 较大 亲脂 部分 结构 中 中 很好 大孔 吸附 树脂 中 中 好 离子交换型 离子 交换 树脂 离子交换及 憎水吸附 可成为带电的形式 好 好 差 亲 水 型 硅胶 硅藻 土 棉纤 维 填料表面水层与有机溶剂流动相之间的分配（硅胶可能还有吸附作用） 较亲脂 好 中 中 * 体内药物分析 * SPE与LLE及沉淀蛋白法的比较 SPE—— 高提取率及高选择性，快速、 简单，可自动化，应用较多 LLE——两相间分配平衡时间较长萃取回收 率及选择性随药物及萃取条件而变化 沉淀蛋白法——快速简便、回收率高； 待测物含量低时不适用 第三章 生物样品与样品制备 第二节 生物样品的预处理 * 体内药物分析 * 3．自动化SPE技术 优点 ① 节约时间，400个/hr，确保了较高的工作效率 ② 减少了操作误差，提高准确度和精密度 ③ 安全性好，可避免人对有毒样品的接触 缺点 ① 残留物对测定的影响 ② 在采用连续测定时，要考虑样品理化 性质的稳定性对测定的影响 第三章 生物样品与样品制备 第二节 生物样品的预处理 返回 (三)样品的分离与纯化 * 体内药物分析 * 4．固相微萃取法 （Solid-phase microextraction SPME ） SPME装置简单，类似于气相色