疾病治疗的新方法__培训课件.pptVIP

逆 转 录 病 毒 载 体 缺点： （1）病毒基因容量有限，一般只能插入7kb左右片段 （2）病毒随机插入靶细胞基因组中，因病毒具有强大 的启动子和增强子，能使插入点附近的基因过度 表达或失活，插入的外源基因可能不适当的表达； （3）逆转录病毒有致癌作用，可能使受体细胞癌变。 （4）只能感染正在分裂的细胞 腺 病 毒 载 体 优点： （1）插入外源DNA片段长 （2）不需要正在分裂的靶细胞 （3）可以原位感染 （4）病毒滴度高 （5）一般不整合到宿主的基因组中，减少插入突 变的潜在危险 腺 病 毒 载 体 缺点： 不整合入宿主细胞基因组，因此不能在细胞内长期存在，需要反复给药，可能会引起对输注的腺病毒产生免疫反应，阻止重复感染。 受体（靶）细胞的选择 （1）必须较坚固，便于体外培养和进行遗传技术操作； （2）易于由人体分离又便于输回体内； （3）具有增殖优势，生命周期长，能存活几月至几年，或整个生命周期； （4）易于受外源遗传物质转化。 原则： 受体（靶）细胞的选择 常用细胞： 外周血T淋巴细胞 皮肤成纤维细胞 造血干细胞 ——地中海贫血、严重联合免疫缺陷病 肝细胞 ——家族性高胆固醇血症、低密度脂蛋白病 比较常用 人类的基因治疗 （1）单基因遗传病 12%，多采用基因添加策略 （2）肿瘤 63%，多采用靶向杀伤特异细胞、靶向抑制基因表达、基因添加等策略 （3）感染性疾病（6%） （4）血管疾病（8%） 单基因遗传病的基因治疗 ADA（腺苷酸脱氨酶）缺乏症 属于AR遗传病 由于腺苷酸脱氨酶缺乏，导致脱氨腺苷酸增多，改变了甲基化能力，产生毒性效应，使T淋巴细胞受损，引起反复感染等症状。 传统的治疗方法：骨髓移植 ADA的基因治疗 ADA基因 逆转录病毒载体 重组分子 LTR ADA SV neo LTR 患者T淋巴细胞 抗CD3单克隆抗体 IL-2 刺激 细胞分裂 导入 基因表达 10天 回输患者体内 每隔1~2个月治疗1次 治疗10次 患者体内ADA水平达正常25% 遗传病的基因治疗 乙型血友病 属于XR遗传病 形成原因：凝血因子Ⅸ缺乏 临床表现： 易于出血、凝血时间长、在轻伤或小手术后常出血不止。 基因定位：Xq26.3~27.2 乙型血友病的基因治疗 Ⅸ因子基因 逆转录病毒载体 重组分子 LTR FⅨ neo SV PBO LTR 导入 仓鼠细胞 FⅨ表达 患者皮肤成纤维细胞 FⅨ表达 患者皮肤成纤维细胞 （体外培养） FⅨ表达 FⅨ表达水平达正常人5% 回输患者体内 肿瘤的基因治疗 肿瘤基因治疗策略： 1 细胞因子导入 2 自杀基因导入 3 反义核酸技术 4 抑癌基因导入 细胞因子介导的肿瘤基因治疗 IL-2 （白细胞介素-2） TNF （肿瘤坏死因子） 逆转录病毒载体 导入 肿瘤浸润淋巴细胞 （体外培养的自体细胞） 从肿瘤组织中分离 特异性进入自体肿瘤部位 在自体肿瘤部位持续存在 无副作用 回输患者体内 进入自体肿瘤部位，提高细胞因子杀伤作用 自杀基因介导的肿瘤基因治疗 原理： 用（逆转录）病毒载体将编码某种酶的基因（自杀基因）转染到肿瘤细胞中，此酶可将一种无害的药物前体转变为细胞毒复合物，进而杀伤肿瘤细胞（肿瘤细胞不能复制而死亡）。这种基因载体只能在特定的组织或肿瘤中表达，而正常细胞中不表达。 自杀基因 + 病毒载体 转染 重组载体 药物前体 （无毒） 基因 酶 　　　　 药物复合物 （有毒） 细胞死亡 常用自杀基因——胸苷激酶（TK）基因 单纯疱疹病毒TK基因： 催化脱氧胸苷（TdR）磷酸化为脱氧胸苷酸 催化胸苷类似物GCV磷酸化 哺乳动物TK基因：