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固肾定喘丸质量标准研究 　　【摘 要】目的：建立固肾定喘丸中牛膝和牡丹皮的TLC鉴别方法以及补骨脂素和异补骨脂素的含量测定方法。方法：采用TLC鉴别方法鉴别固肾定喘丸中的牛膝和牡丹皮，以及采用HPLC法测定固肾定喘丸中补骨脂素和异补骨脂素的含量。结果：固肾定喘丸中设计的牛膝和牡丹皮的TLC鉴别方法阴性均有干扰，不能作为牛膝和牡丹皮的TLC鉴别方法；用HPLC法测得固肾定喘丸中补骨脂素和异补骨脂素的含量应分别不少于0.48mg/g和0.45mg/g。结论：所设计HPLC法测得固肾定喘丸中补骨脂素和异补骨脂素的含量，亦简便准确，又能有效地排除其它未知组分的干扰，因此，可作为固肾定喘丸的质量控制指标。 　　【关键词】牛膝；牡丹皮；补骨脂；TLC法；HPLC法 　　【中图分类号】R286.02 【文献标识码】A 【文章编号】1004—7484（2013）11—0014—03 　　1 前言 　　目前，国内对于固肾定喘丸的质量标准来源于《中华人民共和国卫生部药品标准》，标准中对于固肾定喘丸中的牛膝没有任何鉴定方法，对牡丹皮和补骨脂也仅有显微鉴别。为了使固肾定喘丸的质量标准更为全面，从而更好更准确地指导质检人员对固肾定喘丸的质量检验工作，使药品的质量得到更好的保证，参考《中华人民共和国药典》2005年版及其他相关文献资料，对固肾定喘丸中牛膝和牡丹皮的薄层鉴别方法以及对补骨脂素和异补骨脂素采用HPLC法含量测定。 　　2 仪器与试剂 　　2.1 仪器 　　Agilent1200高校液相色谱仪，紫外–分光光度计（HELIOS YT）。 　　2.2 试剂 　　乙醇、石油醚、乙醚、丙酮、三氯甲烷、环己烷、乙酸乙酯、甲醇 、醋酸、水均为分析纯。 　　3 溶液的制备 　　3.1 牛膝TLC鉴别溶液的制备 　　供试品溶液的制备：取固肾定喘丸7.6g，加70%乙醇30ml，盐酸2ml，加热浓缩至约5ml，用石油醚20ml振摇提取，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。 　　对照药材溶液的制备：取牛膝粉末2g，加70%乙醇20ml，加热浓缩至约5ml，加水10ml，用石油醚20ml提取，提取液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为对照品溶液。 　　对照品溶液的制备：精密称齐墩果酸对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作对照品溶液。 　　牛膝阴性对照溶液的制备：除牛膝之外，取固肾定喘丸各成分按处方比例配制好，称取7.6g加70%乙醇30ml，盐酸2ml，浓缩至约5ml，用石油醚20ml振摇提取，提取液挥去石油醚，残渣加乙醇1ml使溶解，作为空白溶液。 　　3.2 牡丹皮TLC鉴别溶液的制备 　　供试品溶液的制备：取固肾健脾丸3.8g，研碎，加乙醚20ml，丙酮2ml使溶解，作为供试品溶液。 　　对照药材溶液的制备：取牡丹皮粉末1g，加乙醚10ml，丙酮2ml使溶解，作为对照品溶液。 　　对照品溶液的制备：精密称取丹皮酚对照品，加丙酮制成每1ml含5mg的溶液，作对照品溶液。 　　牡丹皮阴性对照溶液的制备：除牡丹皮之外，取固肾健脾丸各成分按处方比例配制好，称取3.8g加乙醚20ml，丙酮2ml使溶解，作为空白溶液。 　　3.3补骨脂素与异补骨脂素含量测定溶液的制备 　　供试品溶液的制备：取固肾定喘丸研细，取约1g，加入甲醇25ml，用微孔滤膜（0.45um）滤过，作为作为供试品溶液。 　　对照品溶液的制备：精密称取减压干燥至恒重的补骨脂素对照品。2.5mg，加甲醇溶解，精密量取2 ml，置l0ml量瓶中.加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每lml中含补骨脂素0.05 mg）。 　　同法取异补骨脂素对照品2.5mg制成对照品溶液（每lml中含异补骨脂素0.05 mg）。 　　补骨脂阴性对照溶液的制备：除补骨脂之外，取固肾健脾丸各成分按处方比例配制好，取约1g，精密加入甲醇25ml，用微孔滤膜（0.45um）滤过，取续滤液，作为作为空白溶液。 　　4 方法与结果 　　4.1 牛膝TLC 鉴别试验 　　样品溶液、对照药材溶液及空白溶液的点样量均为10ul，对照品溶液的点样量为5ul。用硅胶G自制板，以三氯甲烷一甲醇（40：1）为展开剂，上行展开，展距5～7cm，取出晾干。喷以磷钼酸试液，在110℃加热至斑点显色清晰。结果与记录（见图1-1，图1-2，图1-2） 　　（1）肉桂原料溶液（2）山药原料溶液（3）金樱子原料溶液（4）齐墩果酸对照品（5）茯苓原料溶液（6）车前子原料溶液（7）附子原料溶液 　　结果：由图2-1可知，在供试品色谱中，在与牡丹皮对照药材和丹皮酚对照品相应的位置上，均有相应的斑点出现，但牡丹皮阴性对照有干扰。并经试验确定其干扰药材为补骨脂。 　　4.3 补骨脂素与异补骨脂素含