去卵巢和肌注地塞米松对大鼠血管钙含量和骨密度的影响.docVIP

去卵巢和肌注地塞米松对大鼠血管钙含量和骨密度的影响 　　摘要 目的：观察去卵巢和地塞米松肌肉注射对大鼠血管钙含量和骨密度的影响。方法：对雌性Wistar大鼠分别进行去卵巢及肌肉注射地塞米松，观察去卵巢及地塞米松肌肉注射对血管钙含量和骨密度的影响。雌性Wistar大鼠共分为4组，即对照组、假手术组、去卵巢组和地米注射组，10周后，进行主动脉钙含量、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase， ALP）活性及骨钙素（osteocalcin， OC）含量测定，判断血管钙化程度；用骨密度仪测定大鼠骨密度以反映骨质疏松程度。结果：去卵巢组和地米注射组血管钙含量均升高，明显高于对照组和假手术组（P0.01﹚；两组腰椎骨密度均低于对照组（P0.01，P0.05﹚，去卵巢组股骨骨密度亦低于对照组（P0.05﹚。结论： 去卵巢和肌注地塞米松均可导致大鼠骨密度降低，同时可增加血管钙含量，其机制有待进一步探讨。 　　关键词： 去卵巢大鼠；地塞米松注射；骨质疏松；血管钙化 　　血管钙化常发生于动脉粥样硬化性血管病变，也存在于糖尿病、肾病血管病变，高血压等疾病的病理过程中，可导致血栓形成、动脉粥样硬化斑块破裂等严重后果，是心血管疾病的重要危险因素[1]。以往认为血管钙化是钙盐在血管壁的被动沉积，然而近年来许多研究结果显示，血管钙化是一个主动的、可调节的过程，与骨形成过程有许多相似之处[2]。骨质疏松是一种以骨量减少、骨组织微细结构退化为特征，致使骨的脆性增加以及易发生骨折的全身性疾病。令人感兴趣的是，在临床上发现血管钙化与骨质疏松可并存于同一个体[3]，这一矛盾现象的出现，提示两者可能存在某种内在的联系。本研究在去卵巢和地塞米松肌肉注射两种动物模型上，观察两种方法对血管钙含量和骨密度的影响，旨在对临床预防及治疗决策提供理论基础。 　　1材料与方法 　　1.1动物分组及造模方法 　　三月龄健康雌性Wistar大鼠32只，清洁级，体重180-220g，由内蒙古大学实验动物中心提供。随机分为4组（每组8只），对照组：普通饲料喂养，不做特殊处理。假手术组：只切除部分脂肪组织后缝合。去卵巢组：按照文献制备去卵巢大鼠模型[4]。地塞米松组：按文献方法制备[5]。 　　1.2试剂与药品 　　地塞米松磷酸钠注射液；骨钙素放免试剂盒（北京北方生物技术研究所）；羟脯氨酸测试盒（南京建成生物制品有限公司）；碱性磷酸酶试剂盒（南京建成生物制品有限公司）。其余试剂均为市售分析纯。 　　1.3主要仪器 　　原子吸收分光光度计（JenanovAA300）；双能X线骨密度仪（NORLAND，XR-36）；全自动生化分析仪（BECKMAN）；XH-6080型γ放射免疫计数器；TU-1810紫外可见分光光度计。 　　1.4取材及标本制备 　　大鼠共同喂养10周后，注射过量戊巴比妥钠处死动物。处死前置于代谢笼中收集24小时尿液（-20℃保存待测）。断头取血5ml，分离血清（-20℃贮存备用，待测各项生化指标）。迅速剖开动物取胸腹主动脉全长用PBS冲洗后，去除外膜后于-70℃储存备用。取腰椎2-4节段及右股骨全长，清除肌肉及结缔组织后于-40℃保存待测。 　　1.5血管总钙含量测定 　　取胸主动脉1cm （约10mg）80℃烤干， 组织称重，加入2mol/L硝酸2ml消化，180℃烤干，冷却后加入去离子水（含27nmol/L的氯化钾和27μmol/L的氯化镧）10ml复溶，取2ml加入1%氯化锶100μl，用原子吸收分光光度计在422.7nm波长处读取吸光度，测定组织的钙含量，并换算成nmol/mg.pr。 　　1.6血管碱性磷酸酶（ALP）活性测定 　　取腹主动脉约1cm制备组织匀浆，离心吸取上清液，按药盒说明书操作测定血管组织ALP活性。结果用考马斯亮蓝法测定的总蛋白含量进行标准化，单位为U/mg.pr。 　　1.7血管骨钙素（OC）放免测定 　　取腹主动脉约1cm制备组织匀浆，离心后吸取上清液，骨钙素浓度用125I放免法进行测定，结果用考马斯亮蓝法测定的总蛋白含量进行标准化，单位为ng/mg.pr。 　　1.8骨密度测定 　　采用双能X线骨密度仪，应用小动物软件测定大鼠右侧股骨及腰椎骨密度。 　　1.9血液和尿液生化指标测定 　　血清钙、磷、碱性磷酸酶活性，尿钙、磷、尿肌酐送生化实验室采用全自动生化分析仪测定，各项指标均为集中检测。血清骨钙素、尿羟脯氨酸（HOP）测定参照试剂盒说明进行。 　　1.10统计学处理 　　各组实验结果以均数±标准差（x±s）表示。使用SPSS10.0软件进行统计学处理。用单因素方差分析、组间比较用q检验作统计学处理，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1血管总钙含量、AL