RP—HPLC测定人尿液中甲磺酸帕珠沙星的浓度.docVIP

RP—HPLC测定人尿液中甲磺酸帕珠沙星的浓度 　　[摘要] 目的 建立测定甲磺酸帕珠沙星的尿药浓度的方法，计算累积尿药排泄率。 方法 采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法，色谱柱为C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），柱温35℃；流动相：乙腈-甲醇-水（6∶12∶82，含0.01%磷酸和0.01%三乙胺）；流速：1.10 ml/min；检测波长：245 nm。 结果 甲磺酸帕珠沙星最低定量浓度为13.6 μg/ml；尿药标准曲线线性范围为13.6～2720 μg/ml（r=0.9997），方法回收率90%；日内、日间精密度（RSD）10.0%。30名健康志愿者进行单剂量静脉注射低、中、高三种剂量的注射用甲磺酸帕珠沙星后，帕珠沙星在24 h内尿液中的累积尿药排泄率分别为（92.63±5.04）%、（91.21±2.09）%、（90.22±3.53）%。 结论 该方法快速﹑简便﹑准确度高，专属性好，无杂质干扰，适用于帕珠沙星体内药物浓度的测定及药代动力学研究。 　　[关键词] 甲磺酸帕珠沙星；反相高效液相色谱法；尿药浓度 　　[中图分类号] R96 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）03（b）-0009-03 　　甲磺酸帕珠沙星是由日本富山公司开发的新一代喹诺酮类抗生素[1]。它通过抑制DNA促旋酶和拓扑异构酶Ⅳ来发挥抗菌作用。体内抗菌研究表明，本品抗菌谱与环丙沙星，亚胺培南相同，比头孢他定和庆大霉素广，革兰氏阳性、革兰氏阴性及厌氧菌对帕珠沙星十分敏感[2-4]。目前，国外已有对甲磺酸帕珠沙星的体内药代动力学的研究[5-6]，但较少。国内也有甲磺酸帕珠沙星药代动力学的研究[7-11]，且通过高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）测定血药浓度的研究较多[7-15]，而通过测定尿药浓度计算累积尿药排泄率的研究较少[7-8，16]，为此本研究建立了反相高效液相色谱（reversed phase high performance liquid chromatography，RP-HPLC）法测定尿液中甲磺酸帕珠沙星的浓度的方法，研究30名健康志愿者的尿药浓度及其累积尿药排泄率，为临床用药提供依据。 　　1 试药与仪器 　　1.1 试药 　　甲磺酸帕珠沙星注射液（规格：300 mg/瓶，批号：040430，含量为标示量的98.8%，清华紫光古汉生物药品有限公司）；甲磺酸帕珠沙星注射液对照品（清华紫光古汉生物药品有限公司）；左氧氟沙星（内标物，中国药品生物制品检定所）；甲醇（批色谱纯，湖南化工研究院精细化工研究院）；乙腈（批号52334，CALEDON公司）。 　　1.2 仪器 　　美国Agilent 1100 HPLC-UV配备G1313A自动进样器和G1315B二极管阵列紫外检测器。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　Agilent ZORBAX Eclipse-C18柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），柱温：35℃；流动相：乙腈-甲醇-水（6∶12∶82，含0.01%磷酸和0.01%三乙胺）；流速1.10 ml/min；检测波长为：245 nm；进样量：10 μl。 　　2.2 对照品溶液及内标溶液的配制 　　精密称取甲磺酸帕珠沙星对照品适量，分别用甲醇定容为6.8 mg/ml的储备液，4℃储存，使用时稀释至所需浓度。 　　精密称取左氧氟沙星适量，用甲醇配制成3 mg/ml的内标溶液，4℃冷藏，临用时稀释至适宜浓度。 　　2.3 含药尿液样品的处理 　　吸取尿样于1.5 ml塑料离心管中，高速离心5 min，吸取50 μl尿样于1.5 ml试管中，加内标（3 mg/ml左氧氟沙星甲醇液）15 μl，加入450 μl流动相，漩涡振荡2 min，取上清液10 μl进样分析。 　　2.4 专属性考察 　　在上述色谱条件下，按上述方法操作，比较空白尿液、内标左氧氟沙星加甲磺酸帕珠沙星标准品、空白尿样加内标左氧氟沙星加甲磺酸帕珠沙星对照品以及志愿者尿样的样本色谱图，考察方法的转一性，结果如图1。 　　2.5 标准曲线和最低定量浓度 　　准确吸取空白尿样50 μl于试管中加入内标左氧氟沙星（3 mg/ml）15 μl，及帕珠沙星对照品溶液，配成含帕珠沙星为13.6、27.2、54.4、136、272、544、1360、2720 μg/ml的一系列浓度，按样品处理项下操作。以浓度C对峰面积比值进行线形回归，用最小二乘法计算得甲磺酸帕珠沙星回归方程为：A=5.046C+0.008（r=0.9997）。本方法甲磺酸帕珠沙星最低定量浓度为13.6 μg/m