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不同年龄健康人群肠道微生态的变化 　　【文章编号】1004-7484（2014）01-0102-02 　　在人体，肠道菌群是一个复杂的微生态系统，目前在肠道中细菌已知多达 500 余种，大约1013～1014个，厌氧菌约占98%以上。肠道菌群的种类和数量是相对稳定的， 受饮食、内分泌、卫生习惯、地理环境、年龄及卫生条件的影响而变动。本研究以不同年龄阶段的健康人群为对象，通过常规细菌培养及荧光定量PCR来检测其肠道菌群的数量，进一步研究肠道众多菌群与年龄关系，希望找到长寿老人相关肠道菌群。 　　1 对象与方法 　　1.1 对象 　　共收集健康人群粪便标本81例，其中：少年组26例，男性16例，女性10例，年龄范围8-15岁，平均年龄12.3岁；青壮年人群30例，男性17例，女性13例，年龄范围27-50岁，平均年龄36.7岁； 老年人群25例，男性15例，女性10例，年龄范围65-80岁，平均年龄71.2岁。三组人群采样前无腹泻便秘等胃肠道疾病、肝胆疾病及心脑肾等重要脏器疾病史，4周内未用过微生态活菌制剂（如酸奶）及抗生素。 　　1.2 方法 　　1.2.1实验者留取粪便标本于无菌袋中，置入厌氧罐内，立即送检分离，所需时间严格控制在30min之内。 　　1.2.2目的菌群定性、定量检测方法 　　常规细菌培养：无菌获取新鲜粪便1g，置稀释液A内，振荡器制匀浆，依次连续10倍稀释到10-8，于不同稀释度取标本液50uL并用“L”棒涂抹于不同培养基上，依据研究目的，对所选目的菌进行定性定量检测。 　　非选择性培养基：肠道厌氧菌培养基BL、肠道需氧菌培养基； 　　选择性培养基：双歧杆菌培养基、类杆菌培养基、乳杆菌培养基、肠杆菌培养基、肠球菌培养基、酵母菌培养基。 　　培养条件：厌氧菌培养采用厌氧盒，于37℃培养48 h～72 h；需氧菌用普通温箱37℃培养48h。 　　菌种鉴定：厌氧菌三级鉴定法。采用API生化鉴定系统，将细菌鉴定到属水平。检测下限为2×10-1 CFU/g湿便。 　　荧光定量PCR：粪便总DNA抽提：采用QIAamp? DNA粪便袖珍试剂盒（Qiagen， Hilden， German）抽提粪便总DNA，按试剂盒说明操作。所有抽提获得的粪便总DNA置于-80℃保存备用。PCR扩增：采用相应特异性引物，在不同条件下扩增肠杆菌、乳酸杆菌、类杆菌以及双歧杆菌（4种菌属）DNA。定量PCR仪检测：采用MJ Opticon 2定量PCR仪（Bio-Rad， USA）及MJ Opticon MonitorTM分析软件（Version 3.1）分析粪便中细菌基因拷贝数。 　　1.3统计学处理 　　所有数据用均数±标准差表达，两组比较采用成组的检验，多组比较采用方差分析，P0.05 为差异有统计学意义，所有的统计学分析均用SPSS10.0进行处理。 　　2结果 　　2.1 粪便细菌培养结果 　　2.1.1少年组、?壮年组、老年组三组肠道菌群值及B/E值比较 　　老年组肠杆菌较少年组及?壮年组明显增加（8.51±0.99VS 9.57±1.11 p0.05；8.29±1.09 VS 9.57±1.11 p0.01），少年组及青壮年组之间对比无差异；肠球菌及类杆菌菌群值与少年组及?壮年组对比有增加，经统计学分析明显差异；双歧杆菌及双歧杆菌与肠杆菌的比值（B/E值）老年组则明显降低，见表 1。 　　3讨论 　　肠道微生态与人的寿命、 健康密切相关。微生态平衡时，肠内细菌就有益于人体，而在微生态失衡时，有害菌产生的毒性物质或内毒素的释放，以及肠内细菌导致的内源性感染等又会引发疾病的产生， 加速衰老和死亡。老年人正常微生物种类与数量的改变与疾病的发生、 发展之间存在着非常微妙的关系。体肠道是一个巨大的细菌库， 人的胃肠道栖息着大约30 属550 多种细菌， 主要由厌氧菌 兼性厌氧菌和需氧菌组成， 其中专性厌氧菌占99%以上， 而仅拟杆菌及双歧杆菌就占细菌总数90%以上[1]，沿着胃肠道，肠道微生态的分布不同[2- 3]。人体肠道正常菌群在肠腔内形成3个生物层：深层近黏膜为膜菌群，由双歧杆菌和乳酸杆菌组成，属共生菌；中层为厌氧菌，包括消化链球菌、优杆菌等； 表层为腔菌群，主要是大肠杆菌、肠球菌等需氧和兼性厌氧菌。它们以一定的数量和比例，存在人体的肠道中，起营养、生物拮抗、免疫、 促进生长、抗肿瘤和防止衰老的作用[4]。双歧杆菌通过利用短链糖类物质而大量繁殖，形成竞争的微生态环境，从而抑制致病菌的生长，乳杆菌则是通过产酸降低肠道的pH值，从而达到形成不利有害菌生长的酸性环境，它们已是公认的肠道益生菌，与宿主终生相伴。菌群失调是指肠道原籍菌发生定性或定量的改变，出现益生菌与致病菌比例明显改变。双歧菌