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DPPH法测定诃子提取物抗氧化活性 　　【摘 要】目的：研究诃子提取物的体外抗氧化活性。方法：取诃子药材，选用8倍用量的70%乙醇组织破碎提取三次，提取时间为0.5min，经闪式浓缩器浓缩成为相对密度1.08的浸膏液（80℃测），进行喷雾干燥（进风温度180℃，出风温度85℃）收集喷雾干燥粉末即得样品，利用二苯代苦味酰肼自由基（DPPH）测定其抗氧化活性。结果：诃子提取物具有一定的抗氧化活性，其DPPH清除率标准为IC50值（mg/ml）?0.34。结论：DPPH法用于诃子提取物的体外抗氧化测定具有重复性好、灵敏度高等特点，该提取物作为天然防腐剂以及抗氧化剂具有极大地开发价值。 　　【关键词】诃子提取物； DPPH；抗氧化性 　　【中图分类号】R931 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）05-0664-02 　　诃子为使君子科榄仁属植物诃子（Terminalia chebula Retz）及其变种绒毛诃子（T.chebula Retz.Var. tomentella Kurz）的干燥成熟果实，我国云南、西藏、广西、广东等地均有分布。它是一味常用的收涩中药，气微，味酸涩，具有涩肠止泻、敛肺止咳、降火利咽、调和药性、解毒等功效【1】。现代研究诃子具有抗氧化、、抗病毒、抗菌、强心以及抗癌、抗诱变、抗阿米巴原虫、抗动脉粥样硬化以及抗淋球菌等药理作用【2】。二苯代苦味肼基自由基（DPPH）【3】的稳定性主要来自共振稳定作用及三个苯环的空间障碍，而夹在其中间氮原子上的不成对电子不能发挥其应有的电子成对作用。DPPH可用于自由基清除剂的筛选研究工作，其乙醇溶液呈深紫色，在可见光区最大吸收峰为540nm（已测），当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系。因而可用分光法进行定量分析，因而通过研究天然药物清除自由基的性质来评价该物质的抗氧化能力。 　　1 材料和仪器 　　诃子提取物（自制）；DPPH（ 二苯代苦味酰肼自由基， SIGMA 公司）， 　　无水乙醇（洛阳昊华化学试剂有限公司） 　　BS210S型电子天平（北京塞多利斯天平有限公司）；岛津UV-2201型紫外可见分光光度计；闪式提取器（JHBE-50A，北京金鼐科技发展有限公司）；闪式浓缩器（JFC-106A 北京金鼐科技公司）；WPG5型小型喷雾干燥机；真空干燥机 　　2 实验方法 　　2.1 DPPH最大吸收波长的确立 取2ml浓度为0.12mg?ml-1的DPPH溶液，以无水乙醇为参比测量不同波长下的吸光度值，在400～600nm之间每隔10nm测定一下他们的吸光度。然后再在较大的吸光度范围内即：530～550nm之间每隔2nm进行一下吸光度的测定从而确定最大吸收波长。结果如图2-1所示。从而确定DPPH溶液的最大吸收波长为540nm。 　　图2-1 DPPH吸收光谱曲线 　　2.2 DPPH 体系稳定性考察： 测定2mlDPPH 在无水乙醇介质中光吸收值与时间的关系。结果显示DPPH 的光吸收值可在1小时内基本不变。因此所有样品在1小时内测定完毕 　　2.3 样品溶液的制备 称取诃子标准提取物0.12约g，精密称定，定容于50ml的容量瓶中，分别吸取上述溶液各100?l，150?l，200?l，250?l，300?l，350?l用无水乙醇定容于1ml的容量瓶中，且分别编号，以上操作平行进行三份。 　　3 实验结果 　　DPPH自由基清除率的测定：准确称取25.2 mgDPPH，用无水乙醇溶解并定容于50ml，制成的DPPH 溶液浓度为0.5 mg?ml-1，量取此溶液24 ml，用无水乙醇定容至100 ml，制成浓度为0.12 mg?ml-1。吸取2 ml DPPH 溶液（0.12 mg?ml-1）于0.5ml 带塞离心管中，加入0.9mlTris-HCl（50mmol， pH7.4），0.2 ml 待测液，摇匀，在闭光的条件下反应进行40min以后，以无水乙醇为参比，并于540 nm 处测定吸光值Ai。同时以0.2 ml无水乙醇代替待测液做空白对照，测定吸光值Af。根据以下公式计算清除率：DPPH（%）=（1-Ai/Af）×100 　　式中： Ai 为加入待测液时DPPH 溶液的吸光值； 　　Af 为未加入待测液时DPPH 溶液的吸光值 　　测定得A值三次的平均值分别为 0.985、0.776、0.634、0.500、0.405、0.332，无水乙醇对照A值为1.412。将所测得A值代入清除率公式，分别计算其清除率为30.24%、45.04%、55.1%、64.59%、71.32%、76.49%。其相对应的诃子提取物的浓度为0.249 mg?ml-1