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第三章 血栓与止血一般检验 ? 实验一 血小板计数 【目的】 掌握血小板(platelet)的显微镜目视计数方法。 【原理】 血液经稀释液按一定比例稀释和破坏红细胞后，滴入血细胞计数板内，在显微镜下计数一定范围内的血小板数量，经过换算求出每升血液中血小板的数量。 【器材】 1．试管、试管架。 2．吸管、吸耳球。 3．微量吸管、胶吸头、干脱脂棉。 4．玻棒。 5．改良Neubauer计数板、盖玻片、绸布。 【试剂】 10g/L草酸铵稀释液：草酸铵10g，EDTA-Na 2 0.12g溶于1000ml蒸馏水中，混匀。 【标本】 EDTA-K2抗凝静脉血或末梢血。 【操作】 1．吸取稀释液 准确吸取10g/L草酸铵稀释液0.38ml，置于清洁小试管中。 2．采血及加血 常规消毒无名指，穿刺后，让血液自然流出，准确采血20μL，置于含有草酸铵的稀释液中，立即充分混匀。 3．稀释 待完全溶血后再混匀1min。 4．充液静置 取混匀的血小板悬液1滴充入计数池内，静置10～15min，使血小板充分下沉。空气干燥季节应将血细胞计数板置湿盒内。 5．计数 用高倍镜计数中央大方格的四角和中央共5个中方格内血小板数量。 6．计算 血小板数/L＝N×5×10×20×106=N×109 N： 表示5个中方格内数得的血小板数。 × 5： 将5个中方格血小板数换算成1个大方格血小板数。 ×10： 将1个大方格血小板数换算成1μl血液内血小板数。 ×20： 血液的稀释倍数。 ×106： 由1μl换算成1L。 7．报告方式 XX×109/L。 8．操作示意见图2-1。 【参考值】 （100～300）×109/L。 【注意事项】 1．稀释液的要求 定期检查稀释液的质量，检测前应先作稀释液空白计数，计数值为零时方可充液计数。草酸铵稀释液要清洁，无细菌、尘埃等污染。存放时间较长后应过滤后再使用。 2．采血 毛细血管采血时，针刺应达3mm深，使血液流畅。拭去第1滴血后立即采血，以防血小板聚集和破坏。如果同时做白细胞和血小板计数时，应先采血做血小板计数。 3．制备悬液 血液加入血小板稀释液内要充分混匀，必须轻轻摇动标本2min或200次以上，但不可过度振荡，以免导致血小板破坏、聚集或有气泡，引起计数误差。 4．充池 血小板悬液充入计数池内需要静置10～15min，使血小板完全下沉后再计数。但应注意保持湿度，避免水分蒸发而影响计数结果。血小板如成簇分布，应重新采血复查。溶血欠佳时，应更换稀释液或用200倍稀释法计数整个中间大方格内的全部血小板数，最后计算出每升血液中的血小板数量。 5．计数的光线要求 计数时光线不可太强，注意微有折光性的血小板与尘埃等的鉴别，附着在血细胞旁的血小板也要注意，不要漏数。 6．计数 ①如果血小板悬液充入计数池后时间较长，血小板会失去光泽而不易辨认，因此应掌握好计数时间，应在1h内计数完毕，否则结果偏低。②每份标本最好计数2次，若计数之差在10%以内，取其均值报告。若计数之差大于10%，应作第3次计数，取2次相近结果的均值报告。 7．器材与试剂 所用计量器材必须标准化。草酸铵质量必须是AR级或GR级，若用CP级溶血效果差。 8．药物影响 检查前患者应避免服用含有阿司匹林及其他抗血小板药物。 （刘成玉） ? 实验二 凝血酶原时间测定 一、试管法 【目的】 掌握凝血酶原时间 (prothrombin time, PT ) 测定的试管法。 【原理】 PT 是在体外满足外源性凝血全部条件后的血浆凝固所需的时间。在抗凝血浆中加入过量的组织凝血活酶和Ca2+，使凝血酶原转化为凝血酶，后者使纤维蛋白原转变为纤维蛋白。测定从加入Ca2+ 到血浆开始凝固所需时间，即为PT。 【器材】 1.????? 水浴箱。 2.????? 试管、试管架。 3.????? 吸样枪、吸头。 4.????? 离心机。 5.????? 秒表。 【试剂】 1．25 mmol/L氯化钙凝血活酶试剂(商品试剂) 按说明书要求加一定量蒸馏水溶解、混匀后使用，试剂必须注明国际敏感指数(international sensitivity index，ISI)。 2．正常参比血浆（商品试剂） 用20个以上男女各半正常人血液经109 mmol/L枸橼酸钠抗凝(血液与抗凝剂之比为9：1)。以3000r/min离心10 min ，分离血浆后，混合分装为每瓶1 ml ，冻干保存。 【标本】 109 mmol/L枸橼酸钠抗凝的静脉血(血液与抗凝剂之比为9：1)。 【操作】 1．分离乏血小板血浆 将标本以3 000r/min