HPLC法测定六味地黄胶囊中马钱苷含量.docVIP

HPLC法测定六味地黄胶囊中马钱苷含量 　　摘要：目的 建立六味地黄胶囊中马钱苷含量测定方法。方法 采用Phenomenex色谱柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-0.1%磷酸（8：92）；流速1.0ml?min-1，柱温30℃，检测波长为236nm。结果 马钱苷在11.25μg/ml～180.0μg/ml范围内，呈良好的线性关系（r=0.9993），定量限为7.88ng?ml-1，回收率为97.1%，RSD为1.2%（n=9）。结论 本方法简便、准确。方法的稳定性、重复性良好，可作为六味地黄胶囊质量分析控制方法。 　　关键词：六味地黄胶囊；马钱苷；高效液相色谱 　　六味地黄胶囊由熟地黄、酒萸肉、牡丹皮、山药、茯苓泽泻六味中药经提取精制而成，为硬胶囊剂，内容物为浅棕色至棕色的粉末和颗粒；味苦，微酸。本方源于脉安冲剂，具有滋阴补肾之功，临床用于肾阴亏损、头晕耳鸣、骨蒸潮热、盗汗遗精[1]。酒萸肉为山茱萸科植物山茱萸Cornus of ficinalisSieb.etZucc.的干燥成熟果肉。山茱萸中主要成分有有机酸及其酯类、五环三萜及其酯类、环烯醚萜苷类、鞣质类、多糖、维生素、氨基酸和矿物质等。《中国药典》[1]六味地黄胶囊含量测定项采用薄层扫描法测定熊果酸存在于许多药材，如山楂，马鞭草，车前草等非山茱萸的特有成分。并与齐墩果酸在天然植物中是共生共存的[2]，他们都属三萜酸，在化学结构上是差向异构体，极性几乎无差别，在薄层板上应用无法分离开，所以测定的量是熊果酸与齐墩果酸含量的总和。为加强本品内在质量控制，同时对方法中供试品制备的提取溶剂、提取方法、提取时间、提取溶剂用量均进行了考察，制定了本品中的马钱苷含量测定方法。 　　1仪器与试药 　　1.1仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪，G1315D DAD二极管阵列检测器，所用软件为ChemStation色谱工作站。Milli-Q Advantage A10超纯水机，Satorius ME5电子分析天平，电热恒温水浴锅。 　　1.2试药 六味地黄胶囊（江苏康缘药业股份有限公司，规格每粒装0.3g，批号120701、120702、130101、130102）；马钱苷对照品，购自中国食品药品检定研究院（批号为120752-201115）；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。 　　2色谱条件 　　色谱柱：Phenomenex色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸（8：92）；流速：1.0ml?min-1；检测波长：236nm；柱温：30℃；进样量：10μl，见图1。 　　3制备溶液 　　3.1对照品 取适量马钱苷，精密称定，混入50%甲醇制成每1ml含马钱苷60μg的溶液，即得。 　　3.2供试品 取装量差异项下的本品，混匀，取约0.5g，精密称定，置锥形瓶中，精密倒入25ml50%甲醇，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，再称定重量，用甲醇补足缺失量，摇匀，滤过。取滤液10ml，加氧化铝柱（100～200目，4g，内径为1cm）上，用50ml 40%甲醇洗脱，收集流出液及洗脱液，蒸干，残渣用50%甲醇溶解，转移至10ml量瓶中并稀释到刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 　　4线性关系考察 　　取马钱苷适量，制得一定浓度的标准品储备液（浓度为180μg/ml），将储备液分别稀释成浓度为11.25μg/ml、22.50μg/ml、45.00μg/ml、90.00μg/ml、180.0μg/ml的溶液，进样5μl，以进样质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）绘制标准曲线，得马钱苷回归方程为Y=35.4757X+0.7569，r=0.9998，说明马钱苷在11.25μg/ml～180.0μg/ml，呈良好线性关系。 　　按信噪比（S/N）为10：1计算，定量限为7.78ng/ml。 　　5精密度试验 　　吸取马钱苷溶液各5μl，重复6次，用峰面积计算RSD值为0.79%，说明该方法精密度良好。 　　6重复性试验 　　取同一供试品（批号为120701），按3.2制备供试品溶液，平行制备6份，测定，结果马钱苷的平均含量为3.1mg/g，RSD=1.0%，说明该方法重复性良好。 　　7中间精密度试验 　　取同一供试品（批号为120701），按3.2制备供试品溶液，由两位分析人员于不同时间分别制备6份供试品并分别使用两台仪器测定，计算RSD值为1.3%，说明其方法中间精密度良好。 　　8稳定性试验 　　取同一供试品（批号为120701），按3.2步骤，分别在第0、1、2、4、6、8、12、16h进行测定，计算峰面积RSD值马钱苷为0.5%，说明供试品溶液在16h内稳定良好。 　　9回收率试验