色谱分析技术在兽药残留及违禁添加物检测中的应用具体实例.pptVIP

填料保留目标化合物 针对填料保留机理不同： 填料保留杂质 固相萃取（Solid?Phase?Extraction，SPE）是一个由柱色谱分离过程、分离机理、固定相和溶剂的选择等组成的试样预处理技术，由液固萃取和液相色谱技术相结合发展而来，与高效液相色谱有许多相似之处。但是，SPE柱的填料粒径（40μm）大于HPLC填料（3~10?μm）。 ? 填料保留目标化合物机理 填料保留杂质机理 * 色谱分析技术在兽药残留及违禁添加物检测中的应用具体实例 赵立军 四川省畜产品安全检测中心 2013年12月 国内检测方法的分类： 国家标准方法、地方标准方法、 行业标准方法、企业标准方法 ....... 检测方法标准的基本内容： 1.范围 2.规范性引用文件 3.原理 4.试剂和材料 5.仪器设备 6.试样的制备 7.测定步骤 8.结果计算 9.精密度 10.附录 1、样品提取2、样品净化3、上机测定4、结果计算 畜产品检测分析的一般步骤： 1. 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法—高效液相色谱法 2. 可食动物肌肉中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定 —液相色谱紫外检测法 3.蛋中苏丹红染料的检测方法—高效液相色谱法 4. 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定-高效液相色谱法 原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法—高效液相色谱法（原文参见GB/T 22388-2008）2008-10-07发布 2008-10-07实施 1.1 方法原理 试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取，经阳离子交换固相萃取柱净化后， 用高效液相色谱测定，外标法定量。 1.2 样品处理 1.2.1提取 （1）液态奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等 称取2g（精确至0.01g）试样于50mL具塞塑料离心管中，加入15mL三氯乙酸溶液和5mL乙腈，超声提取10min，再振荡提取10min后，以不低于4000 r/min离心10min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL滤液，加入5mL水混匀后做待净化液。 注：若样品中脂肪含量较高，可以用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE柱净化。 1.2.2 净化 阳离子固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物，60mg/3mL ，或性能相当者。使用前依次用3mL甲醇、5mL水活化。 将待净化液转移至固相萃取柱中。依次用3mL水和3mL甲醇洗涤，抽至近干后，用6mL氨化甲醇溶液洗脱。整个固相萃取过程流速不超过1mL/min。洗脱液于50℃下用氮气吹干，残留物用1mL流动相定容，涡旋混合1 min，过微孔滤膜后，供HPLC测定。 a）色谱柱：C8柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5μm，或相当者； C18柱，250 mm×4.6 mm（i.d.），5μm，或相当者。 b) 流动相：C8柱，离子对试剂缓冲液-乙腈（85+15，体积比），混匀。 C18柱，离子对试剂缓冲液-乙腈（90+10，体积比），混匀。 c) 流速：1.0 mL/min。 d) 柱温：40℃。 e) 波长：240 nm。 f) 进样量：20 μL。 1.3 高效液相色谱测定 HPLC 参考条件 1.4 标准曲线的绘制 用流动相将三聚氰胺标准储备液逐级稀释得到的浓度为0.8、2、20、40、80μg/mL的标准工作液，浓度由低到高进样检测，以峰面积-浓度作图，得到标准曲线回归方程。 1.5 定量测定 待测样液中三聚氰胺的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。 1.6 结果计算 试样中三聚氰胺的含量由色谱数据处理软件或按式（1）计算获得： X＝ 式中： X——试样中三聚氰胺的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； A——样液中三聚氰胺的峰面积； c——标准溶液中三聚氰胺的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V——样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； As——标准溶液中三聚氰胺的峰面积； m——试样的质量，单位为克（g）； f——稀释倍数。 1.7 空白实验 除不称取样品外，均按上述测定条件和步聚进行。 1.8 回收率及方法定量限 在添加浓度2mg/kg~10 mg/kg浓度范围内，回收率在80%~110%之间， 相对标准偏差小