4植物细胞压片观察.docxVIP

实验四、植物细胞压片观察引言： 詹纳斯绿B是一种活体染色剂，专一用于线粒体的染色。它可以和线粒体中的细胞色素C氧化酶结合，从而出现蓝绿色。原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态（即有色状态）呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于0℃～4℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌，由于液泡在一般情况下呈酸性反应。因此，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色，在这种情况下，原生质和细胞壁一般不着色；死细胞由于原生质变性凝固，胞液不能维持在液泡内。因此，用中性红染色后，不产生液泡着色现象。相反，中性红的阳离子，却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，而使原生质与细胞核染色。1材料与方法1.1 材料 实验室购买的新鲜洋葱、穿心莲等，理化楼附近的嫩叶花瓣花药等组织。实验在北京市北京科技大学理化楼120进行。1.2 试剂使用生理盐水配制如下染液：0.02% 亚甲基蓝染液、1% 詹姆斯绿B染液、0.03% 中性红，以上染液需现用现配。1.3 方法1.3.1 洋葱细胞核染色取一载玻片，在其中央加一滴亚甲基蓝染液。用镊子从洋葱鳞片的内表面撕下薄薄一层，放在载玻片上的染料中，并使其展开，染10分钟，用吸管吸取蒸馏水，滴于染色的载玻片上，使染液冲淡，最后使标本周围液体近于无色。此时，用镊子取一盖玻片，先将它的一边轻轻接触到载玻片染液的边缘。此时再慢慢地放下盖玻片，这样可以避免出现气泡。如载玻片上水过多，可用一吸水纸从盖玻片的一侧吸去过多的染液。显微镜下观察细胞核染色情况、拍照。1.3.2 洋葱细胞线粒体染色取一载玻片，在其中央加一滴詹纳斯绿染液。用镊子从洋葱鳞片的内表面撕下薄薄一层，染10分钟，洗去染液，盖上盖玻片，避免出现气泡。先用低倍镜进行观察，找到细胞后，即可转入高倍镜继续观察，此时，要注意细胞质中被染成蓝绿色的小颗粒，即线粒体。观察染色情况、拍照。1.3.3 植物细胞叶绿体观察新鲜的穿心莲叶片组织细胞的叶绿体用去离子水直接压片观察无需染色。盖玻片施压时用力必须得当，不可使盖玻片平移，否则会造成细胞无规则叠压，不易观察到典型的结构。1.3.4 液泡观察用中性红对植物细胞进行活体染色，以显示植物细胞的液泡以及高尔基体。因为中性红只能染高尔基体的液泡部分，因此有一定的局限性。2 结果与讨论：植物实验 穿心莲叶绿体：植物实验 洋葱细胞核：植物实验 洋葱细胞线粒体：植物实验 穿心莲液泡：结论：如图所示，亚甲基蓝染液染出的洋葱细胞核、去离子水直接压片的穿心莲叶绿体和中性红染出的液泡都清晰可见。但詹纳斯绿染色的洋葱细胞线粒体却分辨不出来。原本詹纳斯绿的染色原理是线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。所以可以猜测失败原因是细胞中氧化性物质太多，被全部染色，形成干扰。必须指出的是，只有具有活性的细胞色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化，从而使它显出颜色，因此，在实验过程中务必保持所取的材料的活性。通常，需要把生物材料置于０℃～４℃的冰水浴低温中，并且操作要迅速。参考文献：陆嘉琴，生物学，2014，30.1，（37-38）