《微生物检验非发酵菌及检验》.docVIP

第二十五章　非发酵菌及检验本章考点：　　1.概述：概念　　2.假单胞菌属　　●概念　　●分类　　●铜绿假单胞菌临床意义和微生物学检查　　3.不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属一、概述　　非发酵菌主要是指一群①不发酵或不分解糖类的②革兰阴性③无芽胞④需氧杆菌。目前，非发酵菌包括13个属。主要有假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属、莫拉菌属、黄杆菌属等。这些细菌大多为条件致病菌。　　对于非发酵菌的鉴定，必须首先进行种属间的鉴别，然后进行种间的鉴定。一般实验室只需用几项试验，如氧化酶、O-F试验、动力及鞭毛、菌落色素、硝酸盐还原试验以及在麦康凯琼脂上的生长情况等即可对90%～95%分离的菌株作出初步鉴定。　　1.培养温度：多数非发酵菌适宜生存于自然界，培养温度以30℃为宜。有的更适宜生长于室温（18℃～22℃）。故常规标本应先培养于35℃～37℃，再培养于30℃或室温。　　2.动力与鞭毛：在非发酵菌的鉴定中，细菌是否具有鞭毛及鞭毛的特点有重要的诊断意义。由于非发酵菌大部分为专性需氧菌，在半固体培养基上观察动力不明显，因细菌在琼脂表面生长，底层穿刺生长不良或不生长，故观察非发酵菌的动力以30℃或室温12～24h培养物悬滴法为准。有时需借助鞭毛染色予以鉴定。　　3.氧化酶试验：该试验是鉴定非发酵菌的重要试验，非发酵菌中除不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌及个别假单胞菌外，氧化酶试验均为阳性。　　4.氧化-发酵（O-F）试验：本试验是确定非发酵菌与发酵菌以及测定非发酵菌是否利用糖的基本试验。非发酵菌对葡萄糖的代谢特点是氧化型产生微量酸。在氧化-发酵（O-F）试验中，应为开管产酸，闭管不变。　　5.在麦康凯琼脂上生长情况：如假单胞菌属、不动杆菌属、产碱杆菌属等生长，而莫拉菌属和艾肯菌属等不生长。非发酵菌几种主要菌属的基本特征见表5-25-1。　　表5-25-1　非发醇菌主要菌属的基本特征 菌属 葡萄糖OF 氧化酶 悬滴动力 鞭毛 触酶 硝酸盐还原 麦康凯培养基生长 假单胞菌属 O/－ ＋ ＋ 端鞭毛 ＋ ＋/－ ＋ 不动杆菌属 O/－ － － 无 ＋ － ＋ 产碱杆菌属 － ＋ ＋ 周毛 ＋ ＋/－ ＋ 莫拉菌属 － ＋ － 无 ＋ ＋/－ － 黄杆菌属 O/F ＋ － 无/端鞭毛 ＋ － ＋/－ 无色杆菌属 O ＋ ＋ 周毛 ＋ ＋ ＋ 土壤杆菌属 O ＋ ＋ 周毛 ＋ ＋ ＋ 金氏杆菌属 Ｆ ＋ － 无 － －/＋ － 艾肯菌属 － ＋ － 无 － ＋ －二、假单胞菌属　　假单胞菌属为一大组革兰阴性杆菌，大量存在于水、土壤和空气中。在人类感染的非发酵菌中，假单胞菌属约占70%～80%，主要为铜绿假单胞菌（约55%～65%）。其次为嗜麦芽窄食单胞菌、荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、产碱假单胞菌等。这些菌株也是医院感染的主要病原菌。　　本属菌为无芽胞、无荚膜的革兰阴性杆菌。大小（1.5～3.0）μm×（0.5～1.0）μm，多有极端鞭毛，为专性需氧菌。最适温度为30℃～37℃，营养要求不高，能在普通琼脂上生长。许多菌株能产生水溶性色素和多种胞外酶。　　（一）铜绿假单胞菌　　铜绿假单胞菌是假单胞菌属的代表菌种，俗称绿脓杆菌。是医院感染的主要病原体之一。　　1.生物学特性　　（1）形态与染色：本菌为细长革兰阴性杆菌，大小为（1.5～5.0）μm×（0.5～1.0）μm，无芽胞，无荚膜。有1～3根鞭毛，运动活泼。　　（2）培养特性：为专性需氧菌，生长温度为25℃～42℃，最适温度为35℃，但在4℃不生长，此点可与荧光假单胞菌区别。　　在普通琼脂平板培养基上，经18～24h培养，可形成圆形大小不一，边缘不整齐、扁平、隆起、光滑、湿润的菌落。　　在血液琼脂平板和麦康凯琼脂培养基上，可形成5种不同形态的菌落：①典型型；②大肠菌样型；③粘液型；④侏儒型；⑤粗糙型。　　在肉汤中经35℃18～24h培养，液面可形成菌膜，细菌在深层发育不良，呈微混浊或透明状，菌液上层为蓝绿色。　　铜绿假单胞菌产生的主要色素包括：①绿脓素（水溶性色素），为蓝绿色，可溶于水和氯仿，无荧光性；②荧光素为绿色荧光素，溶于水而不溶于氯仿。本菌产生绿脓素的菌株约75.5%，产生荧光素的菌株约89.9%。　　（3）生化反应：氧化酶阳性，能氧化分解葡萄糖、木糖，产酸不产气。本菌能利用枸橼酸盐，不产生吲哚，不产生H2S，能液化明胶，分解尿素，还原硝酸盐并产生N2。　　2.致病性：铜绿假单胞菌有多种毒力因子，如粘附素、多糖荚膜、外毒素、绿脓素、弹性蛋白酶、磷脂酶C。铜绿假单胞菌引起的局部感染常见于烧伤或创伤后，亦可引起中耳炎、角膜炎、尿道炎和下呼吸道感染，甚至引起心内膜炎、肺炎，严重者可引起败血症，死亡率甚高。　　耐药性：该菌具