第三组的香菇多糖的生产.pptVIP

香菇多糖的简介 香菇多糖：从香菇中分离纯化的一种葡聚糖，是以增强T细胞和巨噬细胞功能为主的免疫增强剂。与化疗或放疗联用可发挥增效减毒作用。 药理作用：具有免疫增强作用，其机制在体内虽无直接杀伤肿瘤细胞作用，但可通过增强机体的免疫功能而发挥抗肿瘤活性。 香菇多糖通过激活巨噬细胞，增强抗体依赖性细胞诱导的细胞毒（ADDC），发挥抗肿瘤活性；此外，香菇多糖还能使肿瘤部位的血管扩张和出血，导致肿瘤出血坏死和完全退化。 香菇多糖的应用 1.香菇多糖在医药领域的应用 　　香菇多糖在治疗胃癌、结肠癌、肺癌等方面具有良好疗效。作为免疫辅助药物，香菇多糖主要用来抑制肿瘤的发生、发展与转移，提高肿瘤对化疗药物的敏感性，改善患者的身体状况，延长其寿命。 2.多糖在保健食品领域的应用 　　香菇多糖是一种特殊的生物活性物质，是一种生物反应增强剂和调节剂，它能增强体液免疫和细胞免疫功能。 一、实验目的 1.巩固糖类化学的知识 2.掌握多糖的提取工艺 3.掌握多糖的检测方法 二、实验原理 在组织中，多糖多与蛋白质以共价相结合，所以在生化产品制备工艺中，往往第一步多用酶降解蛋白质部分或用碱使多糖—蛋白质间的键裂开，以促进多糖在提取时的溶解。碱性提取可避免多糖中硫酸基团水解而破坏。现多采用碱性提取的同时用蛋白质水解酶处理组织。提取液中存在的蛋白质可用普通蛋白质沉淀剂使之沉淀，也可用其他方法使变性沉淀，如适当调pH和加热等。 三、项目器材与试剂 实验器材：组织捣碎机、恒温水浴锅、循环水式真空泵、冷冻离心机、凝胶柱、脱脂棉、再字夹、紫外分光光度计、容量瓶、试管、烧杯,紫外检测仪、记录仪、流量泵、 试剂：氯仿、无水乙醇、丙酮、乙醚、 苯酚-硫酸试剂：苯酚3g,浓硫酸5mL，溶于95mL无水乙醇中。 原料:香菇 四、实验步骤 1、多糖的提取 取10g香菇，于组织捣碎机内，加20倍量的水，90 ℃水浴加热30min，抽滤，得滤液加活性炭（1mg/ml），搅拌吸附1h，抽滤，得滤液，用氯仿萃取（3次）以除尽蛋白质，萃余液中加无水乙醇使其乙醇最终浓度为80%，沉淀12h后，于离心机中离心（4000rpm）30min，沉淀物分别用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤3次，即的香菇多糖提取物。 萃取的操作 向待分离溶液（料液）中加入与之不相互溶解（至多是部分互溶）的萃取剂，形成共存的两个液相。利用原溶剂与萃取剂对各组分的溶解度（包括经化学反应后的溶解）的差别，使它们不等同地分配在两液相中，然后通过两液相的分离，实现组分间的分离。如碘的水溶液用四氯化碳萃取，几乎所有的碘都移到四氯化碳中，碘得以与大量的水分开。 * * 香菇子实体有含量较多的脂类的物质，可以用石油醚、乙醚等低级性溶剂除去脂溶性杂质。 因为香菇肉质太厚，萃取时氯仿很难渗透至其深处，则萃取物的产率低。热水提取法多糖在260nm和280nm波长处有较明显的吸收峰 2、多糖纯化 Sepadex G-100凝胶充分溶胀后装柱，用蒸馏水蒸馏48h。取上述香菇多糖提取物溶于蒸馏水中，离心除去不溶物，上清液上柱分离，用蒸馏水洗脱，洗脱速度5ml/min，200nm波长紫外检测，收集主要峰部分，冷冻干燥得白色香菇多糖，并称重。 3、香菇多糖的分析检测 （1）定性分析—苯酚-硫酸法 苯酚-硫酸试剂：苯酚 3g，浓硫酸5ml，溶于95ml无水乙醇中，喷后，110℃，加热几分钟，糖显棕色。 （2）定量分析—分光光度法 A、标准曲线的制备 精密称取60℃干燥恒重的甘露糖标准品0.1g，置于100ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，用移液管量取对照品溶液0、0.5、1.0、2.0、2.5、3.0ml，分别置于50ml容量瓶中，加蒸馏水至刻度，再各精密吸取1ml，置水浴中加热15min，取出冷却至室温，橘黄色由于浓度从小到大而逐渐加深，将溶液于490nm波长的可见分光光度计处测定吸收度，绘制标准曲线。 B、样品多糖测定 精密称取香菇多糖10.0mg，加水溶解，定量转移入100ml溶液瓶中，加水至刻度，摇匀。准确吸取2.00ml，按上述实验方法显色，测定吸光度，计算香菇多糖含量。