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细胞生物学实验实验32015/4/6 实验3 细胞固定剂及透膜剂对细胞膜透性的影响 姓名：李思露 学号：131140040 实验目的 1．通过观察红细胞在不同液体中的表现，加深对细胞膜选择通透理论的理解 2．探索细胞固定剂及透膜剂对细胞膜通透性的影响 实验原理 1. 红细胞膜为选择性通透性膜，容许某些分子进出细胞，若进入细胞的液体多于出细胞的液体，就会造成红细胞胀大；当细胞体积增加超过67％时，红细胞膜破裂、溶血（胀破，血红蛋白释放到介质中）；而当出细胞的液体多于进入细胞的液体时，红细胞出现皱缩现象。 2. 细胞透膜剂TritonX-100可破坏细胞膜脂质双层而引起正常细胞破坏。 3. 化学固定剂能够使细胞内大分子交联或沉淀，继而由流动状态变为固定状态。 4. 固定前后的细胞在低渗液及透膜剂中的变化不同，可通过溶血实验及选择性透膜染料染色加以显示。 5. 细胞膜对不同物质的通透性 （１）带电离子不能直接通过脂双层膜 （２）小的极性分子，如水、尿素、CO2等，能穿过脂类分子的极性头部区而得以穿过脂双层，穿膜速度取决于油／水分配系数及溶质（水）产生的渗透压。 （３）不带电荷的有机小分子，如一些小分子醇类，可以通过简单扩散（靠浓度差）直接穿过脂质双层进出细胞。 实验材料、试剂及器材 1. 材料：绵羊抗凝全血 2. 试剂 （１）0.01mol/L(pH7.2)PBS （２）10%中性福尔马林固定液 （３）0.4%台盼蓝生理盐水染液 （４）蒸馏水 （５）0.5mol/L氯化钠 （６）0.2% TritonX-100生理盐水 ３.器材 （１）10mL低速离心机、普通光学显微镜 （２）10mL刻度试管、试管架、胶头吸管、载玻片及盖玻片等 实验操作 １． 制备50%绵羊血细胞悬液。 　　　　血细胞样品的准备：取１支１０ｍＬ的刻度离心管，加入５ｍＬ血液，１０００ｒ ／ｍｉｎ离心８ｍｉｎ，弃上清；再向细胞沉淀加５ｍＬ０．９％生理盐水重悬细胞， １０００ｒ／ｍｉｎ离心８ｍｉｎ，弃上清；视细胞沉淀体积，加等体积生理盐水重悬 细胞，使成５０％的细胞悬液。 ２．细胞固定。 （1）取１支10mL刻度离心管，向1支加入0.5mL 50%绵羊血细胞悬液 （2）1000 r/min离心5min弃上清； （3）加入2mL 10%中性福尔马林固定液，固定20min； （4）1000 r/min离心5min弃上清； （5）用氯化钠生理盐水恢复至原来体积。 ３.　固定前后红细胞变化的检测 （1）固定前红细胞在不同渗透性溶液及TritonX-100中的变化检测 1.5mL 0.15mol/L氯化钠溶液+1滴血 1.5mL 0.5mol/L氯化钠溶液+1滴血 1.5mL 蒸馏水 +1滴血 1.5mL 0.2% TritonX-100 的生理盐水溶液 1滴血 （2）固定后红细胞在低渗液及TritonX-100中的变化检测 1.5mL蒸馏水+1滴血 　1.5mL TritonX-100溶液+1滴血。 ４.　检测不同醇溶液对细胞的影响。 实验现象及结论 固定前红细胞在不同渗透性溶液及TritonX-100中的变化检测 序号 溶液类型 实验现象　 实验现象 （１） 0.15mol/L氯化钠溶液 试管中血液浑浊，无溶血 现象发生，显微镜下细胞 形态未发生变化，仍是双 面凹的圆饼状 （２） 0.5mol/L氯化钠溶液 试管中血液浑浊，无溶血 现象发生，显微镜下有一 些细胞发生皱缩。 （３） 蒸馏水 加入血液后立刻溶血（1s之 内），试管由浑浊变得澄清透明， 显微镜下看不到完整的 细胞。 （４） 0.2% TritonX-100 的生理盐水溶液 加入血液后立刻溶血（1s 之内），试管由浑浊变得澄 清透明，制作装片时，滴到 载玻片上的混合液会迅速扩 散至整个玻片，显微镜下看 不到完整的细胞。 同上 红细胞悬液无溶血现象，红细胞形态不发生变。原因是0.15mol/L的氯化钠溶液与红细胞等渗。 红细胞悬液无溶血现象，红细胞边缘出现毛刺，说明红细胞膜发生了皱缩。原因是0.5mol/L的氯化钠溶液的渗透压高于红细胞的渗透压，红细胞失水皱缩。 红细胞悬液出现溶血现象，视野中无完整的红细胞，只有一些破碎的细胞膜。原因是蒸馏水的渗透压低于红细胞的渗透压，红细胞吸水胀破。 红细胞悬液出现溶血现象，视野中无完整的红细胞，只有一些破碎的细胞膜。原因是细胞透膜剂TritonX-100可破坏细胞膜脂质双层而引起正常细胞破坏，大量溶液进入红细胞内使其破碎。 固定后红细胞在低渗液及TritonX-100中的变化检测 序号 溶液类型 实验现象　 （１） 蒸馏水 起初不发生溶血现象，试管内血液浑浊，放置６分３０秒后，试管内血液变得完全澄清透明。 （２） 0.2% TritonX-100的生理盐水溶液