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基因工程习题精选 [第题]　(2011浙江理综, 6,6分) 将ada(腺苷酸脱氨酶基因) 通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是(　　) A. 每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B. 每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点 C. 每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada D. 每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子 [第2题]　(2011海南单科, 31,15分) 回答有关基因工程的问题: (1) 构建基因工程表达载体时, 用不同类型的限制酶切割DNA后, 可能产生黏性末端, 也可能产生　　　末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接, 则应选择能使二者产生　　　(相同、不同) 黏性末端的限制酶。? (2) 利用大肠杆菌生产人胰岛素时, 构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等, 其中启动子的作用是　　　。在用表达载体转化大肠杆菌时, 常用　　　处理大肠杆菌, 以利于表达载体进入; 为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA, 可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交, 该杂交技术称为　　　　　。为了检测胰岛素基因转录的mRNA是否翻译成　　　, 常用抗原—抗体杂交技术。? (3) 如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞, 先要将目的基因插入农杆菌Ti质粒的　　　中, 然后用该农杆菌感染植物细胞, 通过DNA重组将目的基因插入植物细胞的　　　　　　上。? [第题]　(2012福建理综, 32,10分) 肺细胞中的let-7基因表达减弱, 癌基因RAS表达增强, 会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实现表达, 发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。 ? 请回答: (1) 进行过程①时, 需用　　　　酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位, 以驱动let-7基因转录, 该部位称为　　　　。? (2) 进行过程②时, 需用　　　　酶处理贴附在培养皿壁上的细胞, 以利于传代培养。? (3) 研究发现, let-7基因能影响癌基因RAS的表达, 其影响机理如图2。据图分析, 可从细胞中提取　　　　进行分子杂交, 以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制, 可能是由于细胞中　　　　(RAS mRNA/RAS蛋白) 含量减少引起的。? [第题]　(2011安徽理综, 31Ⅱ, 9分) 家蚕细胞具有高效表达外源基因的能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养, 可提取干扰素用于制药。 (1) 进行转基因操作前, 需用　　　　酶短时处理幼蚕组织, 以便获得单个细胞。? (2) 为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达, 需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的　　　　和　　　　之间。? (3) 采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应包含: 扩增缓冲液(含Mg2+) 、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、　　　　　　　　　　　　和　　　　　　　　　。? (4) 利用生物反应器培养家蚕细胞时, 贴壁生长的细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中, 这样可以　　　　　　　　　　　　, 增加培养的细胞数量, 也有利于空气交换。? [第题]　(2012课标, 40,15分) 根据基因工程的有关知识, 回答下列问题: (1) 限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段, 其末端类型有　　　　和　　　　。 (2) 质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下: AATTC……G G……CTTAA 为使运载体与目的基因相连, 含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外, 还可用另一种限制性内切酶切割, 该酶必须具有的特点是　　。 (3) 按其来源不同, 基因工程中所使用的DNA连接酶有两类, 即　　　　DNA连接酶和　　　　DNA连接酶。 (4) 反转录作用的模板是　　　　, 产物是　　　　。若要在体外获得大量反转录产物, 常采用　　　　技术。 (5) 基因工程中除质粒外, 　　　　和　　　　也可作为运载体。 (6) 若用重组质粒转化大肠杆菌, 一般情况下, 不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞, 原因是　　　　　　　。 [第题]　(2012江苏单科, 32,9分) 图1表示含有目的基因D的DNA片段长度(bp即碱基对) 和部分碱基序列, 图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4种限制性核酸内切酶, 它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。 请回答下列问题: ? 图1 图2 (1)