实验十三血清尿素的测定（二乙酰一肟法）.docVIP

实验十七 血清尿素的测定 （二乙酰一肟法在强酸二乙酰缩合成红色的颜色深浅与尿素含量成正比二乙酰不稳定，由二乙酰一肟与强酸作用产生。 【器材】 试管、试管架、微量加样器及吸量管、沸水浴、分光光度计。 【试剂】 1．酸性试剂在三角烧瓶中加去离子水约100ml，然后加入浓硫酸44ml、85%磷酸66ml冷至室温，加入氨基硫脲50mg及硫酸镉 CdSO4·8H2O 2g，溶解后去离子水至1L。置棕色瓶中，4℃可保存半年。 2．二乙酰一肟溶液称二乙酰一肟20g溶于去离子水中并定容至1L。置棕色瓶中，4℃可保存半年。 3．尿素标准贮存液 100mmol/L 精确称取于60～65℃干燥恒重的尿素 M为 60.06 0.6g，溶解于无氨去离子水，并定容至100ml，加0.1g叠氮钠防腐，4℃可保存6个月。 4．尿素标准应用液 5mmol/L 取5ml上述贮存液用无氨去离子水稀释至100ml。按下表操作加入物 ml 空白管 标准管 测定管 血清 － － 0.02 尿素标准应用液 － 0.02 － 去离子水 0.02 － － 二乙酰一肟溶液 0.5 0.5 0.5 酸性试剂 5.0 5.0 5.0 混匀，置沸水浴加热 12 ，取出置冷水中冷却 5 ，以空白管调零，在 540nm 处读取各管吸光度。 【正常参考范围】 1.78～7.14mmol/L血液尿素浓度增高生理性和病理性两方面因素。 生理因素高蛋白饮食引起血清尿素浓度和尿液排出量显著增高。血清尿素浓度男性比女性平均高0.3～0.5mmol/L，随年龄增加有增高倾向。成人日间生理变异平均为0.63mmol/L。 病理因素1）肾前性：最重要的原因是失水，因血液浓缩使肾血流量减少，肾小球滤过率减低而致血液尿素浓度增加。 （2）肾性：肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎等肾小球滤过，血液尿素含量增高。 肾后性：尿路阻塞可引起血液中尿素含量增高，如前列腺肿大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致使尿道受压等。 血尿素浓度降低常见于肝功能衰竭患者。