硫酸链霉素的水解.docVIP

硫酸链霉素的水解实验 一、原理 硫酸链霉素的水解由温度和ph影响。 碱性水解：硫酸链霉素+H2O +其它降解物。 反应速度服从一级反应动力学方程式，式中由始末浓,反应时间的可测量,可以得到反应速度常数k,但此反应的缺点是末浓度不好测。由于吸光度A ELC（A是吸光度， e是吸光系数， L是单位厚度，C是浓度），上式可变成。是斜率为-k的二元一次方程，就容易的k的值。 生成的麦芽酚在酸性溶液下与铁离子反应生成紫红色络合物，用络合物比色法进行测定。 3 3 +Fe3+ → 在两个温度下分别测得两个常数k。由，从而得到反应的活化能E。 二、实验用品 722型分光光计1个， 恒温度槽2个， 碘量瓶（150ml 2个 碘量瓶 250ml 一个， 秒表一个， 移液管 20ml 一支， 移液管 5ml 一支， 烧杯 500ml 1个， 量筒 100ml 一个， 广泛ph试纸， 一定量 0.4%硫酸链霉素水解溶液， 2N氢氧化钠溶液， 0.5%的铁试剂。 四、具体实验 ㈠ Et的测量：100ml量筒量取100ml 0.4%硫酸链霉素水溶液放入150ml碘量瓶中（防止挥发），室温下用2mol/L氢氧化钠溶液调制ph 12为止（调节至12易于麦芽酚的生成，广泛的ph试纸范围大所以选择广泛ph试纸），调好后等分为两份各50ml于150ml碘量瓶中（先调节ph再分开，可减小ph的调节误差，即两份式样的ph差值），立即放入40度和50°恒温水浴中，，开始计时。40℃的每隔15min取样一次，50℃的每隔5min取样一次（这由硫酸链霉素的半衰期决定），分别取六次的样，取样时用移液管准确吸取5.00ml反应液，移到干燥的50ml碘量瓶中，用移液管准确加入20.00ml0.5%铁试剂，至紫红色（此处两步应该快速操作），用722型分光光度计在520nm测吸光度，记录每次的取样时间和吸光度。 E的测定：取样完毕后，将剩余溶液置于沸水浴中加热10min（此处可以适当延时，但是还是同样要求不能挥发），冷却至室温后吸取5.00ml溶液与干燥50ml碘量瓶中，加入20.00ml铁试剂，摇匀，测吸光度，即为全部水解的吸光度。 ㈢ 由所得数据可计算的不同温度下的k值，即可求得活化能E。