组培中常见问题分析.docVIP

组培苗在培养过程中常见问题分析 一、植物褐化 A、原因可能有：1、植物本身含有较多的酚类物质，在切割外植体时，从伤口渗透出来，直接渗入培养基中，或在继代培养时不断形成并渗出。2、（1）外植体的取材部位及季节（2）培养基成分，浓度过高的无机盐和高浓度6-BA、KT等容易加重褐化。（3）培养条件不当，温度过高培养时间过长、光照过强，均可以提高多酚氧化酶的活性。 B、防止措施：1、选择合适的外植体：选取幼龄材料，选合适部位，时间一般在初冬或初春2、暗培养或勤转瓶3、弱光培养、低温培养4、添加活性炭或抗氧化剂等5、可以降低无机盐含量，由全量降为半量，减少铵态氮的含量。 二、玻璃化现象 A、原因可能有：1、培养温度高2、生长素种类及其配制比例不合适。铵态氮及碳源对某些植物培养不适宜。 B、防止措施：1、降低培养瓶内的湿度，增加琼脂量，每瓶接种量减少三分之一2、降低培养温度3、增加光照4、降低培养温度 5、降低培养基中细胞分裂素含量，可以考虑加入适量脱落酸。也可以降低或去除铵态氮。6、在培养基中加入1.0~5.0g/L活性炭。 三、黄化现象 A、原因可能有：1、培养基中铁元素含量不足，激素配比不当，糖用量不足。2、培养瓶温度不适，光照不足。3、pH值有问题。（培养基配置不正确） B、防止措施：1、检查培养基配置过程，保证培养基成分正确添加2、调节培养基的成分和pH值3、控制培养室温度，增加光照，用透气盖改善瓶内通气情况 四、污染现象 A、原因可能有：1、原瓶苗有污染2、接种工具灭菌不彻底3、操作时认为带入菌4、接种环境不干净5、原瓶苗细菌性污染（浑浊水渍状、或泡沫发酵状）常由于灭菌锅未排尽冷空气、灭菌锅压力温度不够，计时不准确造成。6、原瓶苗真菌性污染（出现各种颜色的孢子），可能是由于空气、瓶口及瓶盖真菌孢子引起。 B、防止措施：1、正确使用灭菌锅2、接种工具每次使用完后要消毒灭菌，接种时，手不要碰盘子的任何地方，用镊子夹盘子。3、污染的原瓶苗要及时淘汰，如果原瓶苗数量少要进行灭菌4、接种时，要保证接种环境的干净卫生，台内工具不宜放太多。工作人员要在接种前洗干净手并用75%酒精擦拭双手。5、工作区域紫外消毒要每天进行。6、注意个人卫生 五、变异现象 A、原因可能有：1、分化苗继代次数多，材料老化2、分化苗未在规定时间内转接3、使用激素不当 B、防止措施：1、采用腋芽进行繁殖，后代保持与母株遗传一致性。或采用器官直接诱导不定芽2、严格挑选优良瓶苗作为继代材料，去除有问题的分化苗。3、对于实验性材料，应控制植株的继代次数。一定时间后，重新开始外植体的继代培养。