生物技术实验题目.docVIP

1.高效液相色谱主要用于混合物进行分离，并对分离物进行定性、定量分析，根据高效液相色谱的分离原理，常将液相色谱分为 吸附色谱 、分配色谱 、 离子色谱、亲和色谱四种类型。 2、影响电泳分离的主要因素是：待分离生物大分子的性质、缓冲液的性质、电场强度、温度、电渗、支持介质。 3.液相色谱系统主要用于生物样品的分离纯化，并对分离物进行定性定量分析检测。 1.分级沉淀 从溶液中分步沉淀而分离物质的方法。可以用改变溶液的离子强度、pH或介电常数等，使溶液中不同的物质按溶解度变化的顺序逐步沉淀出来。常用于大分子物质的分离。如逐步增加沉淀剂 如硫酸铵 的饱和度而使不同类型的蛋白质分步沉淀。 2.差速离心法 该方法是交替使用低速和高速离心，用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法。此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。 3.电泳加样缓冲液 就是实验室常说的loading buffer，主要成分是溴酚蓝染料和甘油（实验时是由第五小组配制）。前者用于控制电泳过程，后者增大溶液密度使得加样时样品溶液可以沉入样品凹槽底部。 4.梯度混合 在柱层洗脱液配制成PAGE分离胶配制时使用，是根据分离 样品的性质选择在一定范围内变化的PH或离子浓度。 5.透析 通过小分子经过半透膜扩散到水（或缓冲液）的原理，将小分子与生物大分子分开的一种分离纯化技术。 6、 层析洗脱曲线 在层析过程中以流出液中某离子浓度为纵坐标，洗脱液体积为横坐标作图，得到洗脱曲线。 7.超滤 超滤是以压力为推动力的膜分离技术之一。以大分子与小分子分离为目的，膜孔径在20-1000A之间。 1.蛋白质盐溶盐析的原理是什么？影响盐析的因素有哪些？ 【盐溶】在蛋白质水溶液中，加入少量的中性盐[即稀浓度]，如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等，会增加蛋白质分子表面的电荷，增强蛋白质分子与水分子的作用，从而使蛋白质在水溶液中的溶解度增大。这种现象称为盐溶。 【盐析】向蛋白质溶液中假如高浓度的中性盐,以破坏蛋白质的胶体性质,使蛋白质的溶解度降低而从溶液中析出的现象，叫做盐析。 影响盐析的因素有：（1）温度：（2）pH值：（3）蛋白质浓度：4 离子强度和类型。 2.阳离子树脂一般分为哪两类？有什么区别？ 答： 1 强酸性阳离子树脂 含有大量的强酸性基团，如磺酸基－SO3H，容易在溶液中离解出H+，故呈强酸性。树脂离解后，本体所含的负电基团，如SO3－，能吸附结合溶液中的其他阳离子。这两个反应使树脂中的H+与溶液中的阳离子互相交换。 2 弱酸性阳离子树脂 这类树脂（IONRESIN）含弱酸性基团，如羧基－COOH，能在水中离解出H+ 而呈酸性。色可赛思树脂离解后余下的负电基团，如R-COO－ R为碳氢基团 ，能与溶液中的其他阳离子吸附结合，从而产生阳离子交换作用。这种树脂的酸性即离解性较弱，在低pH下难以离解和进行离子交换，只能在碱性、中性或微酸性溶液中 如pH5～14 起作用。 3、细胞破碎常采用哪些方法？ 不同的生物体或同一生物体的不同部位的组织，其细胞破碎的难易不一，使用的方法也不同。细胞破碎的方法主要有机械法、物理法和生物化学方法。 机械法：是指通过机械切力是组织细胞破碎的方法，主要有： （1）研磨（2）组织捣碎器。 物理法 ：是指通过各种物理因素使组织细胞破碎的方法，在生化制备中的方法有： （1）反复冻融法（2）超声波处理法（3）高压匀浆法（4）冷热交替法。 生物化学方法： （1）自溶法（2）溶胀法（3）酶解法（4）有机溶剂处理法。 4. NC 膜\ PVDF 膜\ 尼龙膜怎样鉴别？ 解答：就结合能力而言：尼龙膜结合 DNA 和 RNA 能力可达 480－600?g/cm2，可结合短至 10bp 的核酸片段； 硝酸纤维素膜结合 DNA 和 RNA 能力可达 80－100?g/cm2，对于 200bp 的核酸片段结合能力不强；PVDF 膜结 合 DNA 和 RNA 能力可达 125－300?g/cm2。硝酸纤维素膜依靠疏水性相互作用结合 DNA，结合不牢固；PVDF 膜结合牢固，耐高温，特别适合于蛋白印迹。 5、以下双波长检测样品层析过程的记录曲线，指出为什么要设计阶梯形洗脱曲线？打算要获得几个样品峰？ 阶梯形洗脱曲目的是为了获得不同的洗脱浓度下的蛋白峰，梯度越高洗脱能力越强。在本实验中需要洗脱的是五个不同梯度样品峰，最后一个是为了冲洗柱子，去除残留杂质。 6．简述膜分离技术的特点 物理变化；不发生相反应；选择性高；浓缩和纯化可一步完成；设备易放大，可分批或连续操作。 7. 离心机集体震动、响声异常，常见的原因有哪些？（3条以上即可 （1）离心管重量不平衡，放置不对称；（2）转头孔内有异物，负荷不平衡或使用了不合格的试管套；（3）转轴上端固定螺帽松动，转轴摩擦或弯曲；（4