22动物细胞工程(答案).docVIP

2.2 动 物 细 胞 工 程（答案） 动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等。 动物细胞培养和核移植技术 1、动物细胞培养 1 概念：从动物机体取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 2 过程： 3 细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上。 细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖。 条件 环境：无菌、无毒的环境。 营养：由合成培养基提供各种营养成分，以及血清、血浆等天然成分。 温度和PH：温度为36.5±0.5℃，PH为7.2～7.4。 气体环境：由含95%的空气和5%的CO2组成。 4．应用 生产有重要价值的的生物制品，如单克隆抗体；检测有毒物质；用于生理、病理、药理等方面的研究。 2、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1 概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞 中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。哺乳动物核移植可分为：胚胎细胞核移植和体细胞核移植。其中难度较高的是体细胞核移植。 2 原理：细胞核具有全能性 3 体细胞移植的过程： 4 应用: 加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育。 保护濒危物种。 生产许多珍贵的医用蛋白。 作为异种移植的供体。 用于组织器官移植。 5 存在问题： 克隆动物存在健康问题，表现出遗传和生理缺陷。 3、动物细胞融合 1 概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程，也叫细胞杂交。 2 过程： 3 意义： 克服了远源杂交不亲和障碍，成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。 4 应用：主要用于制备单克隆抗体。 4、单克隆抗体 1 过程： 2 应用： 作为诊断试剂：能准确识别各种抗原物质，并与其特异性结合。具有准确、高效、简易、快速的优点。 用于治疗疾病和运载药物：制成生物导弹。 3 抗体与单克隆抗体的比较： 产生的细胞 成分 分离的部位 特点 抗体 浆细胞 球蛋白 动物血清 产量低、纯度低、特异性差 单克隆抗体 杂交瘤细胞 球蛋白 培养液或小鼠腹水中 灵敏度高、特异性强、产量高 4 植物细胞培养与动物细胞培养的比较： 原理 培养基 结果 培养目的 过程 植物组织培养 细胞的全能性 固体；营养物质、激素 培养成植株 快速繁殖无病毒植株等 脱分化、再分化 动物细胞培养 细胞增值 液体；营养物质、动物血清 培养成细胞株或细胞系 获得细胞产物或细胞系 元代培养传代培养 5 植物体细胞杂交与动物细胞融合的比较： 细胞融合的原理 细胞融合的方法 诱导方法 用途 结果 植物体细胞杂交 细胞膜的流动性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 离心、电激、振动、显微操作、聚乙二醇等试剂诱导 克服远源杂交不亲和，获得杂种植株 获取杂种植株 动物细胞融合 细胞膜的流动性 使细胞分散后诱导细胞融合 除应用植物体细胞杂交手段外，还有灭活的病毒诱导 制备单克隆抗体的技术之一 获得杂种细胞以生产细胞产品 6 植物细胞工程与动物细胞工程的比较： 植物细胞工程 动物细胞工程 技术手段 植物体细胞杂交、植物组织培养等 动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体的制备、胚胎移植、核移植 所需酶 纤维素酶和果胶酶 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 细胞培养 高度分化的组织（细胞） 愈伤组织 根、芽 植物体 原代培养 传代培养 培养基成分 矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素等 葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、血清、血浆 动物胚胎或幼龄 动物器官或组织　 剪碎 分散的单个细胞 加培养液 胰蛋白酶 细胞悬浮液 原代培养 10代 分装培养瓶 出现第一次危机 传代培养 遗传物质改变 40－50代（　　　　） 出现第二次危机 细胞株 细胞系 提供 供体 动物 体细胞 卵巢卵 母细胞 减II中期 注入 去核 细胞融合 发育 胚胎移植 代孕母体 生出与供体遗传基础相同的个体 细胞培养 去核卵母细胞 重组细胞 重组胚胎 不同DNA的两个细胞 灭活的病毒 细胞 （PEG、电激） 杂交 动物 抗原 发生特异性免疫 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 筛选 原因：有多种杂交细胞 许多杂交瘤 体外培养 体内培养 从 中　提　取 从 中　提　取 单克隆抗体 效应B细胞 细胞融合 培养液 腹水中 目的：筛选出杂交瘤细胞 方法：特定的选择性培养基 筛选：能产生特定抗体的细胞群 细胞培养：原理：细胞增殖 脱分化 再分化