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光电比浊法测定微生物数量 一、实验目的及要求 1．了解光电比浊计数法的原理。 2．学习、掌握光电比浊计数法的操作方法。 二、基本原理 当光线通过微生物菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。在一定的范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比，与光密度成正比，而光密度或透光度可以由光电池精确测出。 用一系列已知菌数的菌悬液测定光密度，作出光密度－菌数标准曲线。然后，以样品液所测得的光密度，从标准曲线中查出对应的菌数。 制作标准曲线时，菌体计数可采用血细胞计数板计数，平板菌落计数或细胞干重测定等方法。本实验采用血细胞计数板计数。 三、实验器材 1．菌种：大肠杆菌培养液 2．仪器、材料：722s分光光度计，血细胞计数板，显微镜，试管，吸水纸，无菌吸管，无菌生理盐水等。 四、操作步骤 1．标准曲线制作 （1）编号 取无菌试管6支，分别编号为1、2、3、4、5、6。 （2）调整菌液浓度 用血细胞计数板计数培养24小时的酿酒酵母菌悬液，并用无菌生理盐水分别稀释调整为每毫升1×106、2×106、4×106、6×106、8×106、10×106菌量的悬液。分装入编号的无菌试管中。 （3）测OD值以无菌生理盐水作空白对照，不同浓度的菌悬液摇匀后于560nm波长测定OD值。 (4)以光密度(OD)值为纵坐标，以每毫升细胞数为横坐标，绘制标准曲线。 2．样品测定 待测样品用无菌生理盐水适当稀释，摇匀，560nm波长测定光密度。测定时用无菌生理盐水作空白对照。 3．根据所测得的光密度值，从标准曲线查得每毫升的含菌数。 五、实验报告 1.结果 每毫升原液菌数=标准曲线查得每毫升的菌数×稀释倍数 2．思考题 (1)光电比浊计数的原理是什么?这种计数法有何优缺点? (2)光电比浊计数在生产实践中有何应用价值? (3)试考虑如何绘制大肠杆菌生长曲线 * *