雾水葛提取物实验方案.docVIP

一、实验原理： 荨麻科雾水葛属植物雾水葛P ouzolz ia zey lanica分布于广东、广西、福建等地, 生于潮湿的山地、沟边、路旁、低山灌丛或疏林中, 是一种常见的中草药。雾水葛性寒、味甘淡，具有清热解毒、健脾消积、利湿清肿及散淤止血的功效, 可主治乳痈、肿毒、痢疾、消化不良、食积腹痛、疳积、水肿、小便不利、跌打损伤、咳血、吐血、外伤出血等多种疾病。 雾水葛的成分：从雾水葛全草中分离出 14 个化合物，分别鉴定为: β-谷甾醇 1 、胡萝卜苷 2 、齐墩果酸 3 、 － 表儿茶素 4 、α-香树脂醇 5 、丁香基-β-芸香糖苷 6 、2α，3α，19α-三羟基-12-烯-28-乌苏酸 7 、东莨菪苷 8 、黄芩素-7-O-α-L-鼠李糖苷 9 、东莨菪素 10 、槲皮素 11 、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷 12 、洋芹素 13 、2α-羟基乌苏酸 14 。 二、仪器与试剂 仪器：锥形瓶、玻璃棒、烧杯、100ml量筒、50ml量筒、10ml量筒、布氏漏斗、滤纸、电子天平、玻璃板（10cm×10cm）、胶头滴管、电磁炉、不锈钢盘子、培养皿、试管、接种环温箱、无菌吸管、无菌微量加样器、无菌不锈钢制的小圆管（管高10毫米，内径6毫米，外径8毫米）、小镊子、酒精灯 试剂：聚酰胺、95%乙醇、蒸馏水、麻油、蜂蜡、对羟基苯甲酸乙酯、雾水葛水提取液软膏、雾水葛醇提取液软膏、雾水葛总黄酮液、大肠杆菌菌种、沙门氏菌菌种、金色葡萄球菌菌种、表皮葡萄球菌菌种、琼脂、琼脂、 三、实验内容 1、提取 水提物的制备 多枝雾水葛去杂，粉碎，取100 g，加 15 倍水加热提取 3 次，每次 1 h滤过，合并滤液，浓缩，加蒸馏水定容至 100 mL，制成含生药 1 g/mL 水提物。（超声提取） 醇提物的制备 多枝雾水葛去杂，粉碎，取100 g，加 15 倍 75%乙醇（制剂分析143页）加热回流提取 3 次，每次1 h，滤过，合并滤液，减压回收溶剂，浓缩成浸膏。用 75%乙醇定容至 100 mL，制成含生药1 g/mL 醇提物。（超声提取） ③总黄酮的提取 用1:40倍于样重的75%乙醇中浸泡,然后用超声波提取30min,连续提取两次,过滤，合并滤液，浓缩，加甲醇适量制成供试品溶液。 2、雾水葛定性鉴别 以雾水葛醇提取液作为供试品。另取槲皮素、黄芩苷、齐墩果酸与β-谷甾醇对照品，分别加75%乙醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品。照薄层谱法试验，吸取上述各溶液1~2ul，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。在与黄芩苷对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点; 在与槲皮素对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点；在与齐墩果酸对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点; 在与β-谷甾醇对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点;。（对于黄芩苷，为观察方便也可喷三氯化铁溶液显示后日光下观察） 以雾水葛水提取液作为供试品。另取槲皮素、黄芩苷、齐墩果酸与β-谷甾醇对照品，分别加蒸馏水制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品。照薄层谱法试验，吸取上述各溶液1~2ul，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。在与黄芩苷对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点; 在与槲皮素对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点；在与齐墩果酸对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点; 在与β-谷甾醇对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点;。（对于黄芩苷，为观察方便也可喷三氯化铁溶液显示后日光下观察） 3、处方 雾水葛稠膏（煎煮浓缩） 适量 药物 麻油 111g 基质（油相） 蜂蜡 55g 基质（油脂性基质） 对羟基苯甲酸乙酯 适量 防腐剂 取上清液浓缩至稠膏，加０．０５％对羟基苯甲酸乙酯，搅匀，取蜂蜡５５ｇ加热熔化，过滤过的麻油１１１ｇ加热搅匀，保温１１０℃～１２０℃，再与保温４０℃～４５℃的稠膏充分搅匀，即得。雾水葛总黄酮提取液、雾水葛水提取液软膏、雾水葛醇提液软膏体外抑菌实验 4、体外抑菌实验 （1）平板法 分别取雾水葛总黄酮提取液、雾水葛水提取液软膏、雾水葛醇提取液软膏与空白软膏各适量于灭菌空白平皿中，将已灭菌营养琼脂冷却至50℃左右，注入18 mL／mt，充分混匀，得到稀释的含药平板，用定量点种法分别接种约为103—104CFU／mL大肠杆菌、沙门氏菌、金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌菌液20μL于普通营养琼脂平板和含药平板上，经37℃，24 h培养，计数生长菌落，对比生长数量的差别，从而判断雾水葛总黄酮提取液、雾水葛水提取液软膏与雾水葛醇提取液软膏的体外抑