注射用双黄连工艺中除热原效果的研究.docVIP

注射用双黄连工艺中除热原效果的研究 　　摘 要：目的：利用注射双黄连工艺，对除热原的效果进行客观的评价。方法：利用动态浊度法测定注射双黄连中活性炭以及切向流超滤系统后细菌毒素的含量变化情况，评价除热原效果。结果：在注射用双黄连工艺中的活性炭与切向流超滤系统药液后，药液中细菌内毒素都有着一定变化，其中注射双黄连活性炭后，细菌内毒素吸附率大于70%，而使用超滤系统配剂药液后，细菌中毒素吸附率超过了70%，超滤系统去除热原双黄连药液中的毒素log大于3。结论：通过研究发现，在中药粉针剂加工制造的过程中，加入活性炭吸附热原具有良好的效果，对于大剂量的细菌内毒素，加入双黄连活性炭并不能达到完全去除的效果，但是使用切向流超滤系统后，去除热原的效果依然比较好。 　　关键词：双黄连工艺；热原；活性炭；注射剂；超滤 　　热原也叫做内毒素，其注射到人的身体内后，会出现不良的反应，比如恶性、出汗、呕吐或者颤栗等等，有的人在注射热原后体温会上升到40℃以上，如果不及时抢救，可能会出现昏迷、虚脱甚至死亡等情况。为了避免在食品或者药品中出现热原这种物质，我国相关部门也出台的安全药剂工艺流程原则，要求相关单位必须采取有效的措施，去除热原这种物质，去除的方法主要是注射双黄连工艺配制的活性炭、或者利用切向流超滤系统，对药剂进行处理、加工，并对其效果进行了多次验证。经过实验与研究发现，建立双黄连工艺去除热原效果评价体系，可以有效的提高中药注射剂的安全性。 　　1 仪器与试药 　　BET-72细菌内毒素测定仪（天津天大天发科技有限公司）；ZH-2BLENDER漩涡混合器（天津药典标准仪器厂）；蠕动泵CL-25型（北京旭邦膜设备责任有限公司）；超滤柱10k、1ft2、Regenerated Cellulose（Millipore Corporation.Billerica MA01821）；针用活性炭（180℃活化4h），批号：090901（浙江杭木工业有限公司活性炭分公司）；定量检测鲎试剂，规格：0.03Eu批号：1002260（湛江博康海洋生物有限公司）；细菌内毒素检查用水，内毒素含量50000Eu/ml；一次性注射器，规格：1mL批号：080927（上海康寿医疗器械有限公司制造）；注射器过滤器（无菌无热原滤器），LotNo.：081117-051（JETBIOFIL提供）；双黄连粉针剂浓配药液批号：100501、100502、100503（哈药集团中药二厂粉针制剂车间提供）。 　　2 方法与结果 　　2.1 水中去除热原的效果方法 　　选取45ml的注射用水，加入5ml的热原，在其1ml进行对比，在水中加入0.25g活性炭，并加热使其沸腾，并让该溶液在微沸的状态下保持15min，在对该溶液进行过滤，再取1ml滤液将其作为活性炭吸附供试品溶液。选取1000ml去离子水，加入50ml热原，再取1ml作为参考对照。将混合后的溶液进行超滤，保留1ml作为超滤供试品溶液。对照溶液梯度对其进行稀释，取1/1000和1/10000两个浓度，分别取0.1ml，加0.1ml试剂，仪器测定。活性炭吸附供试品溶液和超滤供试品溶液各取原液和1/10两个浓度，分别取0.1ml，加0.1ml试剂，仪器测定。重复试验三次。 　　2.2 注射用双黄连浓配药液除热原效果试验 　　取注射用双黄连浓配药液40ml，加10ml自制热原，取1ml作为对照样品，其余加0.25g活性炭，加热至微沸，保持15min，过滤，取1ml滤过液作为活性炭吸附供试品溶液。取注射用双黄连浓配药液500ml，加100ml自制热原，取1ml作为对照，其余超滤，取1ml滤过液作为超滤供试品溶液。照样品溶液梯度稀释（10倍，下同），取1/100、1/1000和1/10000三个浓度，分别取0.1ml，加0.1ml试剂，仪器测定。活性炭吸附供试品溶液和超滤供试品溶液分别梯度稀释，取 1/100、1/1000和1/10000三个浓度，分别取0.1ml，加0.1ml试剂，仪器测定，重复试验三批。 　　2.3 内毒素测定方法 　　2.3.1细菌内毒素标准曲线的制备：取细菌内毒素工作标准品1支，用细菌内毒检查用水将内毒素进行2倍稀释，使其最终浓度分别为2.0、1.0、0.5、0.250、0.125EU/ml的稀释系列，各取0.1ml分别加到预先加有0.1mlTAL的反应管内，混合均匀，插入BET-72细菌内毒素测定系统内进行检测，每个浓度重复3管。标准曲线回归方程为：lgT=2.97976-0.24834lgC，r=0.9956（0.98）。2.3.2动态比浊法干扰试验：以样品的添加内毒素平均回收率来判断，若回收率在50%～200%范围内，表明样品溶液对试剂反应无干扰影响。通过实验研究注射用双黄连浓配药液