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比浊法测定麦迪霉素效价及其影响因素分析 　　摘 要：目的：利用比浊度测定法，对麦迪霉素效价以及影响因素进行分析，并建立比浊度测定麦迪霉素绩效的方法。方法：本实验主要以金黄色葡萄球菌作为试验的菌体，将菌液的浓度控制在1.0%，对菌体的培养测定时间为3～4h左右。结果：通过试验与分析发现，将麦迪霉素的浓度控制在1.0%～3.0U/mL左右，其浓度的对数可以与吸光度形成最佳的线性关系，而且评价回收率可达到100.5%左右，其中RSD为0.12%。结论：通过分析发现，利用微生物比浊度测定麦迪霉素的效价，操作较为简单，而且测定的结果准确率以及效率较高。 　　关键词：比浊度；测定；麦迪霉素；效价；影响因素 　　微生物比浊度法，是国际上惯用的效价测定方法之一，主要利用比浊度法对麦迪霉素的效价进行了测定，还对影响测定结果的因素进行了分析。麦迪霉素属于大环内酯类抗生素，传统测定麦迪霉素效价的方法主要利用是管碟法，其操作比较复杂，而且耗费的时间比较长，测定的效率并不高，而且测定结果容易受到外界因素的影响，使得测定结果缺乏准确性，可信度不高。为了改善这一问题，笔者利用微生物比浊度法，对麦迪霉素的效价进行测定，还对其影响因素进行了分析，比浊度法操作简单，耗费的时间比较短，而且测定结果准确度高，下面笔者对该实验进行简单的介绍。 　　1 实验仪器与试药 　　WBS-101微生物比浊法测定仪（北京先驱威锋技术开发公司），BT25S赛多利斯电子天平（d=0.01mg）。麦迪霉索标准品（中国食品药品检定研究院，编号：130337-9803，效价：980U/rag）；麦迪霉素（明治医药（山东）有限公司，批号：CMEB-201109072；CMEB-201109051；CMEB-201109062）金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]第三代；抗生素检定培养基Ⅲ号pH7.O（北京市三药科技开发公司，批号：1008232）；pH7.8磷酸盐缓冲液。试验所需培养基，比色皿、刻度吸管均灭菌处理。 　　2 实验方法 　　2.1 菌液培养基的制备。测定人员首先需要将金黄色葡萄球菌，密集的划线在营养琼脂上，实验环境的温度要控制在（36±1）℃左右，该菌液需要放置培养16-17h左右，然后需要用灭菌水对菌苔进行清洗，并制成菌原液。取适量菌原液，按1.0%的比例，将其加入到抗生素3号培养基中，作为菌液培养基，然后对其进行稀释至标度，还要保证菌液培养基在580nm的波长处，吸光度为1.0左右。 　　2.2 标准品溶液的配制。取适量麦迪霉素标准品，按2：1的比例，将麦迪霉素与乙醇进行混合溶解，再加入灭菌水对溶液进行稀释，制成1000U/mL的溶液。 　　2.3 供试品溶液配制。对麦迪霉素进行精密称定，按2：1的比例，将麦迪霉素与乙醇混合溶解，加入适量灭菌水，并稀释成1000U/mL的溶液。利用精密量取量技术，加入磷酸缓冲液将溶液稀释为浓度是1.2U/mL以及2.4U/mL的溶液。 　　2.4 测定方法。在灭菌比色皿中，利用精密取量技术，分别加入供试品溶液1mL，然后在灭菌比色皿中分别加入9mL菌液培养基，每个试供品溶液的浓度设置4管，然后立即摇匀，再放入微生物比浊仪中，在37℃的环境下对溶液进行培养，然后对其吸光度进行测定。在培养3h左右后，对吸光度数值在0.3-0.7之前的溶液进行观察，然后对实验结果进行详细的记录，便可停止实验。 　　3 实验结果 　　3.1 线性关系考察。精密量取标准品溶液适量，分别用磷酸盐缓冲液稀释成浓度为1.0、1.5、2.0、2.5、3.0U/mL的溶液，参考上述测定方法测得吸光度，以浓度c的对数值为横坐标，以吸光度A为纵坐标，得线性方程A=0.5996-0.698219C（r=0.9985）。结果表明麦迪霉索在1.0～3.0U/mL的浓度范围内，其对数值与吸光度有良好的线性关系。 　　3.2 加样回收试验。精密称取麦迪霉素标准品与已知含量的供试品适量，按上述测定方法溶解稀释成标准品与供试品溶液贮备液，分别等量精密量取两种溶液，用磷酸盐缓冲液分别稀释成浓度约为1.6U/mL、2.0U/mL、2.4U/mL的溶液，按上述测定方法测定吸光度，计算平均回收率为100.5%，RSD为0.12%，加样回收实验结果见表1。 　　3.3 精密度实验。取新制备的菌培养基10ml，分别加入30只比色皿中进行培养测定，待培养约3h后，记录在0.3-0.7之间的30只比色皿的吸光度值，计算RSD为0.62%。 　　3.4 重复性实验。按精密度考察方法，培养60min时，手动连续测定5次，记录吸光度值，RSD为0.7l%，说明本法重复性较好。 　　3.5 样品效价测定。取麦迪霉索三批（批号：CMEB-201109072；CMEB-20