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七、问答题 1．阐述原核生物的转录终止。 (1)转录终止的两种主要的机制是什么? (2)描述翻译怎样能调节转录终止。 (3)为什么在细菌转录终止中很少涉及到Pho因子? (4)怎样能阻止转录的终止? 2．复制 DNA的聚合酶(DNA依赖的 DNA聚合酶)也有校正功能，解释为什么RNA聚合酶没有这种功能。 3．讨论原核生物基因表达的聚合作用反应定向的重要性。假如核糖体从3’端到5’端读它的模板 mRNA的话，那么将会发生什么情况? 4．概括细菌细胞内的转录过程。 5. 概括典型原核生物启动子的结构和功能，并解释什么是保守序列。 6．转录如何在基因或基因组末端终止? 7．(1)如何区分由启动子起始转录的RNA片段与5’端被加工过的RNA片段; (2)证明多肽是从氨基端到羧基端方向合成的。 8．比较 E．coli rRNA和 tRNA的转录和加工。 9．区别可诱导和可阻遏的基因调控。 10．衰减作用如何调控E. coli中色氨酸操纵子的表达? 11．比较并指出细菌和真核生物RNA 翻译机理的异同。 12．什么是摇摆假说? 13．指出E.coli和真核生物翻译起始的不同。 14．S．N Cohen于1973年构建了三个重组体， pSC102， pSC105， pSC109请说明这三个重组体是如何获得的?各说明了什么? 15．基因克隆是如何使含有单个基因的 DNA片段得到纯化的? 16．什么是细菌的限制—修饰系统(restriction-modificaton system, R-M system) 17．细菌的限制—修饰系统有什么意义? 18．说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。 19．Ⅰ类限制酶具有哪些特点?在基因工程中有什么作用? 20．Ⅲ类限制酶有哪些特点? 21．何谓限制性内切核酸酶的切割频率? 22．什么是限制性内切核酸酶的星号活性?受哪些因素影响? 23．双酶消化法(double digests)绘制限制性内切核酸酶酶谱的原理。 24．什么是 DNA多态性(DNA polymorphism)? 25．限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism，RFLP)。 26．计算下列三种酶各自在某染色体 DNA序列上识别位点间的平均距离： Alu Ⅰ：5’AGCT 3” EcoR Ⅰ: 5’GAATTC 3’ 3 TCGA 5’ 3’CTTAGG 5’ AcyⅠ:5’GPuCGPyC 3’ 3’CPyGCPu5’ (注： Py=任何一种嘧啶； Pu=任何一种嘌呤) 27．在细菌质粒 pBP1的四环素抗性基因 tetR的中间有一个HindⅡ的切点。用HindⅢ 切割果蝇基因组 DNA，以 pBP1为载体构建基因组文库。分子杂交证明克隆15带有果蝇的目的基因。用HindⅢ和EcoRV对克隆15进行了酶切分析，电泳结果如图15.1(用酶切的 pBP1质粒DNA作对照)，旁边标出了片段的大小。 (1)绘制含有插入片段和不含插入片段时的 pBPl的限制性图谱，并标明四环素抗性 基因的位置—; (2)如果用克隆在另一个与 pBP1完全不同源载体上的四环素抗性基因作为探针，进 行 Southern印迹杂交，预测上述电泳图会出现什么样的杂交带? (3)如果用克隆15的果蝇 DNA片段作为探针进行 Southem印迹杂交，放射自显影 的结果又是如何? 28．为什么大多数内切酶被称为“限制”酶。 29．据Science杂志报道:一种重要的遗传疾病可由导致 DNA中碱基替换的诱变剂在体外进行人工诱导。设计一种快速用以鉴定疾病基因型的检测方法。 30．为了绘制长为3.0kb BamH Ⅰ限制性片段的限制性图谱，分别用EcoR Ⅰ、Hpa Ⅱ EcoR Ⅰ十 HpaⅡ消化这一片段的三个样品，然后通过凝胶电泳分离 DNA片段，溴化乙锭染色后观察DNA带型(图15.2)。请根据这些结果，绘制一个限制性图谱，要标明E.coR Ⅰ和HpaⅡ识别位点间的相对位置，以及它们之间的距离(kb)。 31．1967年，有5个实验室几乎同时独立发现了DNA 连接酶，每个实验室的实验有什么特点? 32．简述 DNA和RNA连接酶的催化反应机制。 33. 影响 DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些? 34．什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用? 35. 如何利用 T4 DNA聚合酶制备3’隐含末端或双链平末端? 36. 如何利用 T4 DNA聚合酶进行双链 DNA的3’末端标记? 37．如何利用 T4 DNA聚合酶制备平末端? 38．反转录酶有两种类型，一是来源于