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第三章 转录基本知识 RNA的生物合成 RNA Biosynthesis, Transcription RNA 生物 合成主要内容 一， RNA 基本性质 1，RNA 化学结构 2，RNA 分子结构 3，RNA 种类 及功能 二，转录的分子事件 1，转录概念 2，转录基本特点 3，转录发生过程（原核生物真核生物差异）： （1）转录的酶与蛋白因子 （2）转录启动区域：启动子 （3）转录的起始，延伸及结束 4，真核转录后加工 三：RNA降解 四：RNA转录应用 1，RNA 化学结构RNA /DNA Structure 2 RNA的分子结构 　　RNA的一级结构主要是由AMP、GMP、CMP和UMP四种核糖核苷酸通过3‘，5’磷酸二酯键相连而成的多聚核苷酸链。 天然RNA的二级结构，一般并不像DNA那样都是双螺旋结构，只有在许多区段可发生自身回折，使部分A-U、G-C碱基配对，从而形成短的不规则的螺旋区。不配对的碱基区膨出形成环，被排斥在双螺旋之外。RNA中双螺旋结构的稳定因素，也主要是碱基的堆砌力，其次才是氢键。每一段双螺旋区至少需要4～6对碱基对才能保持稳定。在不同的RNA中，双螺旋区所占比例不同。 构。 3, RNA 种类及功能 RNA按功能不同分为三类，即 信使RNA(mRNA)、转运RNA(tRNA)及核蛋白体RNA(rRNA)。 在大多数细胞中RNA的含量比DNA多5～8倍。 RNA理化特点 RNA与DNA最重要的区别一是RNA只有一条链，二是它的碱基组成与DNA的不同，RNA没有碱基T（胸腺嘧啶），而有碱基U（尿嘧啶）。所以导致他们有以下性质上的不同。 1.两性解离：DNA无，只有酸解离，碱基被屏蔽（在分子内部形成了H键）。RNA有，有PI。 2.粘度大：DNA;RNA，粘度由分子长度/直径决定，DNA为线状分子，RNA为线团。  3.碱的作用：DNA耐碱RNA易被碱水解。 4.显色反应： 鉴别DNA和RNA+浓HCl RNA ------→ 绿色化合物 DNA ------→ 蓝紫色化合物苔黑酚 二苯胺啡啶溴红（荧光染料）和溴嘧啶都可对DNA染色，原理是卡在分子中，DNA的离心和电泳显色可用它们。  5.溶解性：都溶于水而不溶于乙醇，因此，常用乙醇来沉淀溶液中的DNA和RNA。DNA溶于苯酚而RNA不溶，故可用苯酚来沉淀RNA。 6.紫外吸收：核酸的λm＝260nm，碱基展开程度越大，紫外吸收就越厉害。当A＝1时，DNA：50ug/ml，RNA和单链DNA：40ug/ml，寡核苷酸：20ug/ml。用A260/A280还可来表示核酸的纯度。 8.电泳：核苷酸、核酸均可以进行电泳，泳动速度主要由分子大小来决定，因此，电泳是测定核酸分子量的好方法。  紫外分光光度计 A260/A280和A260/A230的含义 A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值的范围为0.1至1.0。 A280nm 是蛋白和酚类物质最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA的A260/A280比值为1.8，纯RNA为2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。比值=1.5相当于50％蛋白质/DNA溶液 A230nm ，是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA和 RNA的A260/A230比值为2.5。若比值小于2.0标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。 A260/A280和A260/A230 ：是核酸纯度的指示值，纯度好的DNA，在pH7-8.5 下其比值应该在2.0 或2.5，A260 / A280的比值， 用于评估样品的纯度， 因为蛋白的吸收峰是280 nm。 纯净的样品比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。 A230是多肽、芳香基团、苯酚和一些碳氢化合物的吸光度，A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、多肽、苯酚等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0 。 在RNA聚合酶的催化下，以一段DNA链为模板合成RNA，从而将DNA所携带的遗传信息传递给RNA的过程称为转录（transcription）。 经转录生成的RNA有多种，主要的是rRNA，tRNA，mRNA，snRNA(small nuclear RNA和HnRNA等。 mRNA携带了DNA的遗传信息，在蛋白质合成中作为合成蛋白质的模板起传递遗传信息的作用。 tRNA的二级结构最